如何选择液相色谱柱？（二）
如何解决色谱柱使用过程中出现的问题
一．一．保留值与分离度重现性不好原因分析
问题 原因 表现
不同色谱柱间差异使用期间柱的变化 填料，键合相不同柱床破坏键合相丢失硅胶基质溶解，强保留分堆积堵塞 保留因子（K）分离子（）柱效（N）
保留因子（K）柱效（N）
柱外效应 系统差易，进样量大，进样0与色谱柱之间，色谱柱与检测器之间管路太长，检测器流通池体积大，接头死体积大等 注效（N）
分离效果变差 流动相组分改变 保留因子（K）柱效变化很小
流速改变 保留因子（K） 分离因子
温度改变 保留因子（K）柱效变化很小
柱平衡慢 重新平衡时间不够 保留因子（K）柱效变化很小
柱超载 样品量太大 保留因子（K） 注效（N）
二 、造成色谱峰（不对称）拖尾的原因
1.色谱柱本身填装问题，筷板堵塞或填料塌陷
2.柱头有污染；
3样本超载；
4样品溶剂不合适]
5.柱外效应
6化学或二次保留（硅基）效应
7缓冲容量不足或不合适
8重金属污染
三、如何解决峰形拖尾的问题
A. 与化学有关的拖尾问题
1 .流动相中，加入30MM的三乙胺（用与碱性化合物）或醋酸胺（用与酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺
2如然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3.降低进样量至〈1UG。
B．与色谱柱有管的拖尾问题
1如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲醇，家1%氢氧化铵混合液冲洗，正向柱可用甲醇冲洗。
2.使用保护柱
C.与HPLC 系统有关的蜂拖尾和峰加宽
1.进样体积过大，通常〈25UL〉
2.进样0与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应〈20CM，内径为0.007〉
3检测器流通池的体积过大
四、如何储存色谱柱
1防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200PPM的叠0钠以抑制细菌成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中家20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。
2.尽可能将色谱柱储存于100%有机溶剂（乙晴最好）中，避免在缓冲溶液中保存。
3.使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15`20陪柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。
4避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。
5将色谱柱的两端用堵有拧好，以免柱床填料干裂。
五、如何选择保护柱
怎样选择保护柱，但又不能影响分离分析？这是色谱工作者经常提出的一 个问题。通常，在选择保护柱之前首先要考虑的是样品是否清洁。对于大部分分析工作者来说，一只1CM
长的保护柱，那么就应选择2CM或3CM长的保护柱，保护柱越长，自然所装添的色谱柱的机会。当然，随着保护柱的长度加长，样品的保留时间会比使用短保护柱长。一般来说，保护柱的内径与分析色谱柱的内径相同或相当即可。
保护柱的填料装填方式也很重要。目前有薄膜装填法的保护柱，使用过程很简单方便，而且可以在实验室中进行干装。但是，其最大的缺点是不经济，特别是针对中国的具体情况，一次性使用相对费用较高。另外，薄膜装填法的保护拄所装填的色谱填料有限，只能提供有限的保护作用。不过也因为所装填的色谱料较少，保护柱的长度也教短，所以对分析样品的保留时间的影响也很小。
另一种保护柱结构其实质是缩短了的色谱分析拄，设计方式上有直连式、手紧式或整替式。整体式设计是有色谱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货，可以非常方便地使用，但不能够被修改。直连式结构设计可在任何时候有色谱工作着来安装连接，可以与任何品牌的色谱分析柱连接使用，而且还可以根据样品的相关情况选择不同的保护柱长度。手上紧即可。另外从保护柱结构又分为是否可以更换保护柱柱芯，可以降低保护柱的使用成本。
大多数人是根据色谱分析柱的填料选择保护柱的填料，正常情况下可以选择与分析色谱柱一样的色谱填料。但是，根据实际是分析工作，也可不必与分析色谱的 填料完全相匹配。
对于选择保护柱的原则是；在满足分析分离要求的前提条件，尽可能的选择较短的保护柱结构。尽可能选择对分离样品小一些保留性的填料。
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