脑脊液的显微镜检查的检查过程

　　主要分五项检查：

　　一、细胞总数

　　(1) 直接计数法适用于脑脊液标本比较清亮或微混。用滴管吸取已混匀的脑脊液标本少许，直接滴入细胞计数板，充入计数池内，静置2-3分钟，低倍镜下计数两个池内的四角和中央大格共10个大格内的细胞数，即为1μl脑脊液中的细胞总数(红、白细胞总数)。在书写报告时，再换算成每升脑脊液中的细胞总数。

　　(2) 稀释计数法适用于如果脑脊液的细胞过多、混浊或带血的脑脊液。可用血红蛋白毛细吸管吸取混匀的脑脊液20μl，加入有红细胞稀释液0.38μl的小试管中，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格的细胞总数，乘以50，即为每微升脑脊液的细胞总数，最后换算成每升脑脊液的细胞总数报告。

　　二、白细胞计数

　　(1) 直接计数：非血性标本，用吸管吸取冰乙酸后全部吹出，使管壁仅附着少许冰乙酸，然后用同一吸管吸取少量混匀的脑脊液标本，数分钟后红细胞就会完全溶解，再滴入计数池内，按上法计数。

　　(2) 稀释计数：如白细胞过多，可用白细胞稀释液稀释后，按上法计数，注意计数结果应乘以稀释倍数。

　　(3) 血性标本的校正计数：混有血液的脑脊液标本混匀后，用1%的冰乙酸溶液稀释后仍按上法计数。为了剔除因出血而带来的白细胞，可用下式进行校正。每微升CSF内白细胞校正数=每微升CSF未校正的白细胞数 -

　　三、白细胞分类计数

　　(1) 直接分类法：在白细胞直接计数后，转高倍镜观察，依据细胞形状和细胞核的形态进行分类，共计数白细胞和内皮细胞100个，分别计算单个核细胞和中性粒细胞所占的比例，以百分数表示。如白细胞总数不足100个，则直接写出单个核细胞和中性粒细胞的具体数字。如白细胞总数在30以下，可不做直接分类计数或改用染色分类计数。

　　(2) 染色分类法：脑脊液标本离心，取沉淀涂片，制成均匀薄膜，置室温或37℃孵箱中，干燥后以瑞氏染色，油镜下进行分类计数。以百分比表示之。

　　四、病原体形态学检查

　　(1) 细菌—临床怀疑流行性脑脊髓膜炎或化脓性脑脊髓膜炎时，应做细菌学涂片检查。操作如下：

　　① 脑脊液标本2-3ml，以3000rpm离心15分钟，去上清液，将沉淀物涂在洁净玻璃片上，共制片2张，涂片自然或在37℃温箱中干燥固定，切勿用火焰固定。

　　② 涂片固定后，一张用亚甲蓝染色，另一张用革兰氏染色。

　　③ 革兰氏染色涂片用于检查肺炎双球菌、流感杆菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、链球菌、大肠杆菌等，亚甲蓝染色用于检查脑膜炎双球菌。如找到细菌，则按其染色性质及形态报告。

　　④ 如怀疑结核性脑膜炎，可将脑脊液标本静置24小时，取其液面薄膜涂片，置37℃温箱中干燥固定，作抗酸染色，油镜下找抗酸杆菌。

　　⑤ 采集标本时应注意污染。显微镜观察时应注意细胞内外的细菌形态，报告时应予以描述。

　　(2) 真菌检查—新型隐球菌的检查

　　① 取脑脊液标本，以2000rpm离心10分钟，沉淀物涂片，加经过过滤的优质细墨汁一滴，混合后加盖玻片显微镜下检查。

　　② 先用低倍镜观察，如发现在黑色背景下有圆形透光小点，中间有一细胞大小的圆形物质，即转用高倍镜仔细观察其结构，新型隐球菌直径5-20μm，可见明显的厚夹膜，周围有较强的折光，并有出芽的球形孢子。

　　③ 发现上述特征，即可报告墨汁涂片找到“隐球菌属”。并须进一步作真菌培养。