磷酸酶在免疫学研究方面的应用介绍
在免疫学研究方面, 已广泛应用AP 标记抗体进行酶联免疫荧光反应(E LISA)和Western 印迹分析, 即将A P 与显色剂或去磷酸化后能发光的底物相互作用来揭示靶与检测酶复合物的存在, 与辣根过氧化物酶相比, AP 用作标记酶的优点是稳定性高、灵敏度高, 缺点是成本高、标记困难。在生物化学和分子生物学方面, 用AP 催化除去DNA 分子的5′末端磷酸基团以防止载体自连是基因克隆中的常规手段之一。用AP 脱去5′末端磷酸基团, 再用(γ-3 2P)A TP 标记5′末端, 可用于化学测序, RNA 测序和特异性DNA 或RN A 片段的图谱构建。应用AP 代替同位素标记核苷酸探针用于分子杂交。研究中最常用的AP 有:
①细菌碱性磷酸酶(BAP)；
② SAP(来源于一种北极虾)；
③小牛肠碱性磷酸酶(CIAP)；
④胎盘碱性磷酸酶(PLAP)和分泌性碱性磷酸酶(SEAP), 后者是前者的C 末端短缺版, 与PLAP 相比, SEAP 没有PLAP 的C末端最后24 个氨基酸(这24 个氨基酸构成了与糖基化磷脂酰肌醇靶向锚定的区域)。
另外, 将phoA基因与其它基因融合表达杂合蛋白可用于基因表达的研究。在1995 年还报道了以AP 作为识别元件的生物传感器。工业上一个普遍的应用是基于巴氏杀菌可破坏AP , 因此将AP 作为检验牛奶的巴氏灭菌的标志。
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