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扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍(十八)

2018.7.27

1.有一干燥室,包括一个冷冻台,保持足够低的温度,同以防止冰晶的生长或再生,有充气装置,以让干燥氮气进入干燥室;

2.有一个真空系统,以保持干燥室的压力在10-100mPa之间,这通常用扩散泵和机械泵来达到;

3.有一个水蒸汽吸附阱,使固体界面附近有很高的水蒸汽梯度,以提高干燥速度,最好的办法是装一个液氮冷阱,用以吸附水蒸汽。冷阱的温度比样品温度低摄氏20℃以上,它与样品距离应少于残余水蒸气分子的平均自由程。另外也可以利用诸如五氧化二磷或硅胶等化学干燥剂,但效果就不如液氮冷阱好。

干燥速度与样品温度、尺寸和形状、样品中结合水与游离水的相对量以及干燥室内的真空度都有关。选择什么温度进行干燥,是个有争议的问题。采用较低的温度,再结晶的危险减少,但干燥时间都大为增加,采用较高的温度,水分去除得较快,但却增加了再结晶的危险,同时会有溶质机体"塌陷"的危险。对于大多数样品,可在样品温度为190K和压力1~2mPa下开始干燥,冷凝器保持在77K,干燥后24~48h内,使温度逐渐回升到室温。如果采用先切片后干燥的办法,可把薄切片暴露在缓慢流动的干冷氮气中,氮气压力为大气压,温度为200K到170K之间,通常在1小时内干燥即可完成。

冷冻干燥过程会影响观察结果。冷冻干燥总会伴随一定程度的皱缩,但比临介点干燥引起的皱缩要小得多。此外,冷冻干燥过程由于支持机体的水分升华,先前溶解的成份必然在组织内重新分布,但由于溶质已与干燥的细胞基体交织在一起,其重新分布仅限于较短的距离。

许多学者的研究使人确信,对冷冻干燥样品进行定量X射线微区分析能够获得生理学上很有意义的数据。


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