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剖析酶标仪的检测原理

2018.8.02

酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同.检测原理介绍如下:

光是电磁波,波长100nm——400nm称为紫外光,400nm——780nm之间的光可被人眼观察到,大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩,是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色,是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下,检测被测物的吸光值。

检测单位:

光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。

检测单位用OD值表示,OD是optical delnsity(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则,OD值与光强度成下述关系:

E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度,Ι0为在检测物之前的光强度,Ι为从被检测物出来的光强度。

OD值由下述公式计算:

E=OD=C×D×E

C为检测物的浓度

D为检测物的厚度

E为摩尔因子

在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收zui多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。

但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收zui小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。

酶标仪检测值计算

仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量,转换成二进位数字信号,zui大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为0%,没有检测物的透光值为100%。则实际检测中,检测物的透光值均在0%——100%之间。透光值的计算如下:

T=(Meas-Min)/(Max-Min)

其中T为透光值,Meas为检测的二进位数值,Min为在0%的情况下检测的二进位数值,Max为在100%的情况下检测的二进位数值,举例如下:

Max=3600 Mn=20 Meas=30

T=(30-20)/3600-20)=0.0028

OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552


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