化学发光检测血清和肝素钠抗凝血浆肌钙蛋白I浓度比较
血清肌钙蛋白I(cTnI)是反映心肌损伤的一种高敏感性、高特异性的标志物,主要用于诊断急性心肌梗死(AMI)、判定心肌损害程度等。中华医学会检验学会2002年建议将cTnT作为检出心肌损伤的“金标准”[1]。由于AMI起病急骤,病情发展迅速,是急诊常见的急性多发病,死亡率高,所以迅速作出诊断是挽救患者生命的重要因素,目前很多医院已经把定量cTnI列为急诊项目。本研究将2008年9月～2009年5月我院门诊收集的200例急诊检测cTnI标本采用肝素钠抗凝血浆和血清配对比较的方法,观察两者对cTnI浓度测定结果的差异。现报道如下:
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
真空肝素钠抗凝管及普通干燥管(湖南省浏阳市医用仪具厂生产);检测仪:采用美国BECKMAN COULTER UnicelTM DXI 600检测仪及其原装配套试剂。
1.2 检测方法
1.2.1 血液标本采集200例门诊急诊患者中,男108例,女92例;年龄10～75岁,平均(34.0±5.3)岁。空腹抽取6 ml静脉血,3 ml注入真空普通干燥管中,3 ml注入真空肝素钠抗凝管中。普通干燥管室温放置30 min待血液凝固后,离心分离得到血清;肝素钠抗凝管放置5～10 min后离心分离得到血浆,除去溶血度>0.1%的标本(即肉眼可见溶血的标本)。
1.2.2 分析方法用DXI600检测仪对200例患者血清及抗凝血浆进行测定,每个标本重复测定2次,取其平均值。测定前仪器按要求进行例行保养及校正,确保仪器性能正常。新试剂盒必须进行定标,质控品必须在控。
1.3 检测原理
cTnI测定是一种双位点酶免法(“夹心法”)测定。将样本与结合碱性磷酸酶的抗cTnI单克隆抗体以及包被抗cTnI单克隆抗体的顺磁性微粒添加到反应管中。人cTnI在固相上与抗cTnI抗体结合,同时抗cTnI抗体-碱性磷酸酶结合物和cTnI分子上不同的抗原位点反应。在反应管内温育完成后,结合在固相上的物质将置于一个磁场内被吸住,而未结合的物质被冲洗除去。然后将化学发光底物Lumi-Phos 530添加到反应管内,由发光检测仪对反应中所产生的光进行测量。所产生光的量与样本内cTnI的浓度成正比。样本内分析物的量由所储存的多点校准曲线来确定。
1.4 统计学处理
计量资料以均数±标准差(x±s)表示,用配对资料t检验分析,P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 100例患者cTnI分组情况
根据厂家提供的正常参考值0～0.4 ng/ml,把患者分为0～0.4 ng/ml和>0.4 ng/ml两组。
100例患者cTnI分组情况
2.2 cTnI浓度比较
血清与肝素钠抗凝血浆cTnI浓度测定结果差异无统计学意义(P>0.05),说明两者都可用于化学发光检测cTnI浓度。。
肝素钠抗凝血浆与血清cTnI浓度测定结果比较(x±s,ng/ml)
3 讨论
心肌肌钙蛋白I是一种收缩蛋白,仅存在于心肌中[2],它是肌钙蛋白复合体(I、T、C)三个亚单位中的一个,在心肌收缩和舒张过程中起重要作用[3]。它有三种亚型:快骨骼肌亚型、慢骨骼肌亚型和心肌亚型(cTnI),我们所说的心肌肌钙蛋白I一般是指心肌亚型。cTnI与快、慢骨骼肌型(sTnI)的氨基酸序列分别存在52%和54%的差异,且cTnI氨基末端比sTnI多31个氨基酸分子残留物,这种独特的氨基酸顺序使之具有较高的心肌特异性。有资料明确记载,骨骼肌无法显示出cTnI,无论在发展过程中或刺激反应过程中都无法显示,而且cTnI在肌钙蛋白系统中也无交叉反应[4]。因此,cTnI的绝对心脏特异性允许心脏和骨骼损伤间的差异存在,也使心肌梗死的诊断区别于肌肉损伤(横纹肌溶解、多发性创伤)和非心脏手术。由于急性心肌梗死起病急骤,病情发展迅速,所以及时确诊是关键,快速检测cTnI显得尤为重要。
肝素钠作为血液抗凝剂,由于其良好的抗凝作用、极少产生溶血及血生化分析影响因素少等优点,被各实验室广泛应用。一般认为肝素的抗凝血作用与其分子中带负电荷的硫酸根有关,带正电荷的碱性物质如鱼精蛋白或甲苯胺蓝都能中和其负电荷,故能抑制其抗凝血作用,一般对测定结果没有影响。但由于肝素具有强酸性并带有负电荷,在某些特定的环境(或者存在某些变性剂)中影响了化学反应的催化环境、缓冲体系甚至是化学反应本身,就可能会出现异常数值[5],但本研究结果未出现此情况。血浆相比血清测定的优点是,血浆不受纤维蛋白网络干扰,红细胞下沉速度快,缩短了标本的离心时间,避免了日常工作中经常发生的纤维蛋白堵孔现象引起的溶解蛋白液浸泡和专用针通电极管道等故障排除的麻烦,为快速检测cTnI争取了时间。从本研究结果可以看出,血清和肝素钠抗凝血浆都可用于化学发光检测cTnI浓度,但由于肝素钠抗凝血浆分离时间更短,对于cTnI这种急诊指标更具优势。
