凯氏定氮法测粗蛋白的实验步骤和注意事项
食品中蛋白质含量的多少是评价粮油食品品质、营养价值的重要指标。测定某些粮食蛋白质的含量，可以做到充分发挥粮油资源的作用，促进合理用粮，节约用粮，对提高粮油资源的利用率具有重要的意义。
以凯氏定氮法为代表的测定含氮量换算蛋白质的方法操作简单、测定结果的准确度和精密度较高，适宜于测定任何形态（固体、液体）的样品，是蛋白质总量测定的经典之一，迄今为止一直作为国内外法定的蛋白质测定方法，就是凯氏半微量定氮法，适用于粮食、油料中粗蛋白的测定，大豆中蛋白质溶解比率的测定。
为了使初学者在操作过程中减少失误，提高试验的成功及测定结果的准确度，本人将自己在实验操作过程中的经验，应注意的几个问题，介绍给大家，仅供参考。
1 原理
样品与浓硫酸共热时，有机物被分解、脱水、炭化。炭化生成的碳与硫酸作用生成二氧化碳和具有还原性的二氧化硫；二氧化硫使蛋白分解后产生的氮还原为氨气，本身则氧化为三氧化硫。
消化过程生成氢，促进并保证了氮到氨气的转化，避免了氮的损失。消化反应生成的三氧化硫、二氧化碳和水因加热而不断挥发逸失，生成的氨气则以铵盐的形式留在消化液中，这样完成了有机氮到无机铵盐的转化。硫酸钾和硫酸铜分别用于提高消化液温度和催化有机物的消化分解。
当消化液碱化后，溶液中铵盐转化为氨气逸出，使氨与其他杂质分离，同时用硼酸溶液吸收氨，水蒸气蒸馏使消化液中氨完全转移到硼酸溶液中。用盐酸标准溶液滴定硼酸溶液中的氨，以测定样液中的总氮量，由总氮量乘以蛋白质系数换算为蛋白质含量J反应式。
2 器具与试剂
2.1 器具 凯氏烧瓶：平底烧瓶：（标准书上为圆底烧瓶）；平底烧瓶加热时增加受热面积，提高仪使用稳固程度；万用电炉；锥形烧瓶（备塞及打孔机）微量滴定管：全自动定氮仪：容量瓶：移液管：量筒：洗耳球、凯氏微量蒸馏装置、胶管等。
2.2试剂
全部试剂应是无氮化合物，其纯度为分析纯，水应是蒸馏水。
浓硫酸--- 过氧化氢--- 水混合液比例 （体积比），在水中缓慢加浓硫酸），冷却后再加入“过氧化氢”混匀备用。有些标准书误印混合液的比例（体积比），配用时一定要当心体积比。此溶液可在阴凉处放置3个月；混合催化剂：称取硫酸铜、硫酸钾、硒粉，混合后在研钵中研磨并通过目筛，混合后备用；氢氧化钠溶液；硼酸溶液 （标准书上有用）浓度，有用度，本人认为浓度，用时量取体积约盐酸溶液；混合指示剂：称取（2甲基红置于研钵中，加入少许乙醇，研磨溶解后加入乙醇；称取（ 2次甲基蓝溶于：乙醇溶液；临用时，将以上两溶液按）：体积比混合，该指示剂在酸性域为紫红色；在；1为时，呈无色；在碱性域为绿色。
3 试样制备与测定方法
3.1试样制备
选取有代表性的试样，用四分法缩减，粉碎后全部通过目筛，装于密封容器中备用。
3.2测定方法
消化试样用量，若粮食作物，一般是，若油料或饼渣应是2.即保证试样粗蛋白含量，减少因粗蛋白含量不同，所用试剂量、反应时间有差异，而影响定结果的重现性。
为保证试样称量准确，先把凯氏烧瓶烘至恒重（精确到），用蜡光纸卷着，根据试样用量已粗称过的样品，缓缓伸进凯氏烧瓶底部并倒入，轻轻取出蜡光纸，然后再称出凯氏烧瓶增加的重量即试样重。标准书上直接用蜡光纸称样品倒入凯氏烧瓶，有时样品不能干净转移，有时为了干净转移样品，要轻弹蜡光纸，而使少部分试样溅到凯氏烧瓶的上中部壁上，浓硫酸--- 过氧化氢--- 水混合液不易浸泡到，加热不易消化，而使测定结果偏低。
试样准确称量后，向凯氏烧瓶中加入混合催化剂2（提高硫酸沸点，使消化的速度加快，而不是标准书中误写 “加入混合指示剂2”,否则消化缓慢，消化终点也不是浅蓝绿色的透明状），同时加入浓硫酸--- 过氧化氢--- 水混合液，稍加振摇，集中浸泡试样，斜置于电炉上，在通风橱内加热进行消化。开始时用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的），待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状时，再继续加热沸腾，取出待消化液冷却至室温后，加水，再待溶液温度降到室温后，干净地转入容量瓶中（用少量水将凯氏烧瓶冲洗），加水稀释至刻度，混匀备用（消化液加水稀释后，应及时进行蒸馏，否则应保存消化液，临用时加水稀释）。
