关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

免疫沉淀实验——免疫沉淀放射性标记抗原

2019.3.28
实验材料

蛋白质

试剂、试剂盒

SDS

仪器、耗材

离心机

实验步骤

1.  按基本方案进行,但以下说明的操作步骤已经修改:

(2b)按所需选用步骤4b所提供的其中之一备择物(①,②,③)预澄清放射性抗原溶液。

(4b)加入1 μl 抗原特异性抗血清,或3 μg 抗原特异性单抗,或抗质特异性杂交瘤培养上 清(克隆化细胞系来源的加30 μl,未克隆化来源的加100 μl)。然后按①,或②、或③进行操作:


①加入1:1抗Ig抗体-Sepharose偶联物胶浆/稀释缓冲液。

②加入1:1蛋白A或G-Sepharose胶浆/稀释缓冲液。


③用裂解缓冲液离心洗涤10%金黄色葡萄球菌Cowan Ⅱ菌株体浑浊液,以稀释缓冲液重悬至10%浓度,加入50 μl 此悬浊液,于4℃振荡10 min。

 

(5b)按基本方案洗涤免疫沉淀物,但来自①或②形成的沉淀,以200 g 离心1 min,而来自③的,1000 g 离心7 min。

(6b)加入20~50 μl SDS样品缓冲液。先不用旋涡混合器旋起混匀,否则琼脂糖或细菌会粘在液面上的管壁。盖紧盖子,在100℃保温5 min,用旋涡混合器旋起,微量离心机离心后,将混合物加样于凝胶,如基本方案步骤7进行分析。

展开


推荐
热点排行
一周推荐
关闭