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离体叶绿体对染料的还原作用(希尔反应)

2019.11.20

原理

离体的完整叶绿体,在合适的氧化剂存在下,例如染料二氯靛酚(DCPIP),当照光时,可以使水光解释放氧气,同时使染料还原,结果染料从原来的蓝紫色变为粉红色至无色。此反应为希尔所发现,故常称为希尔反应。可用分光光度计测定反应前后染料吸光度A的变化,变化在4─5分钟内呈线性关系。

仪器药品

  721型分光光度计    试管

  烧杯          容量瓶

  移液管         试管

  100mmol/L磷酸缓冲液, pH7.3(见附表2)

  0.3mmol/L 2,6椂鹊宸幽疲怀迫—8.7mg二氯靛酚钠,加蒸馏水定容至100ml(如药品纯度低,可适当提高浓度)。

操作步骤

1.加样

取干净试管6支,分为两组,并分别编成1、2、3号,然后按下表加入试剂

注:(1)叶绿体悬液为实验40所制备。

(2)2号管加叶绿体悬液后于沸水浴上煮5分钟,然后用蒸馏水补足丧失的水分。

(3)3号管为比色时调节零点用。

(4)各试管都在最后加入二氯靛酚以开始反应,并立即摇匀进行比色测定,以代表作用时间为0。各管在加染料之前保存在冰浴中。

2.比色

当加入染料后立即摇匀倒入相应的比色杯中,迅速测定吸光度,波长为620nm,此即代表0时的吸光度。然后将比色杯置于离150W灯光约60cm处照光,每隔1分钟快速读下吸光度的变化,连续进行5、6次读数,严格控制照光时间。

3.将结果以每分钟A620的变化量(△A620 /min)为纵坐标,以时间(分钟)为横坐标作图。


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