11种四环素类抗生素的HPLC方法确认
【四环素】
四环素类抗生素(Tetracyclines)是由放线菌产生的一类广谱抗生素，包括金霉素（Chlotetracycline)、土霉素（Oxytetracycline）、四环素（Tetracycline）、及半合成衍生物甲烯土霉素、强力霉素、二甲胺四环素等，其结构均含并四苯基本骨架；广泛用于多种细菌及立克次氏体、衣原体、支原体等所致之感染。四环素类抗生素在酸性和碱性条件下均不稳定，四环素类药物中含有许多羟基、烯醇羟基及羰基，在中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物。与钙或镁离子形成不溶性的钙盐或镁盐，与铁离子形成红色络合物，与铝离子形成黄色络合物。在体内Tetracyclines药物与钙离子形成的络合物呈黄色沉积在骨骼和牙齿上，小儿服用会发生牙齿变黄，孕妇服用后其产儿可能发生牙齿变色，骨骼生长抑制。因此小儿和孕妇对此药因慎用或禁服。
关于国家标准中四环素的检出限：
——动物源性食品中四环素（二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲基金霉素、金霉素、美他环素及多西环素）的检出限——50µg/kg；
——化妆品中四环素的检出限：
二甲胺四环素—25mg/kg 定量限：50mg/kg
土霉素、四环素、去甲基金霉素——10mg/kg 定量限：25mg/kg
金霉素、美他环素、多西环素——5mg/kg 定量限：10mg/kg
脱水四环素、差向脱水四环素——2.5mg/kg 定量限：5mg/kg
——牛奶及奶粉中土霉素、四环素、金霉素、多西环素的检出限：
牛奶中：土霉素、四环素——5µg/kg
金霉素、多西环素——10µg/kg
奶粉中：土霉素、四环素——25µg/kg
金霉素、多西环素——50µg/kg
本方案分离检测的11种四环素类抗生素：二甲胺四环素（MINO）、土霉素（OTC）、四环素（TC）、差向四环素（ETC）、金霉素（CTC）、差向金霉素（MCTC )、脱水四环素（ATC）、差向脱水四环素（ETAC）、甲烯土霉素（MTC）、去甲基金霉素（DMCTC）、多西环素（DC）。
【样品处理过程】
动物肝脏、肾脏、肌肉组织及水产品：称取均匀式样5g（精确到0.01g），置50mL聚丙烯离心管中，分别用20mL、20mL、10mL 0.1mol/L EDTA-Mcllvainc 缓冲溶液冰水浴超声提取三次，每次漩涡混匀1min，超声提取10min，将样品放入赫西仪器TDL5M台式低速冷冻离心机(该机型参数参见http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/2012-10-25/111.html)，定速3000r/min离心10min（温度低于15℃），合并上清液（控制总提取液的体积不超过50mL），定容至50mL，混匀，5000r/min离心10min（温度低于15℃），用快速滤纸过滤，待净化。
净化：准确吸取10mL提取液（相当于1g样品）以1滴/s的速度过HLB固相萃取柱，待样液完全流出后，依次用5mL水和5mL甲醇-水淋洗，弃去全部流出液。2.0Kpa以下减压抽干5min，最后用10mL甲醇+乙酸乙酯洗脱。将全部洗脱液氮吹干（温度低于40℃），用适量的甲醇溶解残渣，过0.45µm滤膜，待测定。
【色谱条件】
色谱柱：C18, 4.6 mm*250 mm，粒度5 µm
检测波长：350nm
检测温度：室温
流 速：1mL/min
流 动 相: A：乙腈 B：0.01moL/L草酸水溶液；梯度洗脱；
【谱图】
