关于聚丙烯酰胺凝胶电泳的常见问题解析
1、 凝胶时间不对,或慢或快,怎么回事?
通常胶在30MIN-1H内凝。如果凝的太慢,可能是TEMED,APS剂量不够或者失效。APS应该现配现用,TEMED不稳定,易被氧化成黄色。如果凝的太快,可能是APS和TEMED用量过多,此时胶太硬易裂,电泳时易烧胶。
2、 电泳时间比正常要长?
可能由于凝胶缓冲系统和电级缓冲系统地PH选择错误,即缓冲系统地PH和被分离物质的等电点差别太小,或缓冲系统的离子强度太高。
3、分离胶加上后为什么要立即加水?
加入分离胶后,立即覆一层双蒸水,一是为了使分离胶界面保持水平,用水就可以把它压平,使蛋白质分子跑时在同一水平线上;二是阻止空气中的氧气对凝胶聚合的抑制作用。
4、连续分离胶体系配制(凝胶板厚度0.75mm,长度10cm)100ml体系:双蒸水37.5ml
尿 素20--50g
10×TBE缓冲液8ml
30%丙烯酰胺10ml
APS(过硫酸铵)500--800ul [注:现配现用]
TEMED(四甲基乙二胺) 23.5ul
推荐