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分光光度法测定发酵食品中微量乙醇的含量

2018.8.13

微量乙醇是低度果酒，含酒精饮料和调味品等发酵食品中重要的风味物质。目前，对于微量乙醇的测定主要以气相色谱法为主，重铬酸盐氧化分光光度法测定微量乙醇含量，是一种快速准确的测定方法，它具有操作简便，所需分析仪器简单的特点，尤其适用于生产和质检部门的日常分析。

一、测定原理

在酸性溶液中，乙醇可被重铬酸氧化生成乙酸，重铬酸钾中的六价铬被还原成三价铬，其反应式为： 3C2H5OH+2K2Cr2O7+8H2SO4=3CH3COOH+2K2SO4+2Cr2(SO4)+11H2O

反应中生成的三价铬为绿色，它在585nm处有最大吸收峰，且溶液颜色的深浅与乙醇含量成正比，可以在分光光度计上比色，通过与标准系列进行比较进行定量。

二、仪器与试剂

1、 UV-1300紫外可见分光光度计（美析仪器）

2、蒸馏装置

3、PHS—3C酸度计

4、乙醇标准溶液：准确吸取2.00mlGR级无水乙醇，置于预先装有少量蒸馏水的100ml容量瓶中，混匀，加水定容至刻度，摇匀备用。

5、重铬酸钾溶液，称取10.00gAR级K2Cr2O7，用少量水溶解，并定容至250ml。

6、浓硫酸：AR级，含量95~98%。

7、1%溴百里酚蓝指示剂

8、 NaoH溶液：C(NaoH)=1.0mol/L

三、测定方法

1、标准曲线的绘制

取7支25mlA级比色管，各加入2.00ml重铬酸钾溶液和2.50ml浓H2SO4，混匀，并冷却，依次加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00和1.25ml乙醇标准溶液，混匀，反应10分钟后加水至刻度，再次混匀，以0号管调零，于585nm波长处分别测定其吸光度，绘制标准曲线。

2、样品的制备

准确移取100.00ml样品于250ml蒸馏烧瓶中,加入25mH2O,再加数滴溴百里酚蓝指示剂，用NaoH溶液滴定至蓝色（深色样品用酸度计指示中和至中性），加几粒沸石，连接好蒸馏装置进行蒸馏，馏出液用100ml容量瓶收集，接收瓶用冰浴进行冷却，缓慢蒸馏至接近刻度时取下，放入20℃水浴中30分钟，用H2O定容至刻度，摇匀，备用。

3、样品的测定

取1.00ml制备好的样品，按标准曲线绘制的方法进行测定，利用回归方程计算出样品中乙醇的含量。

美析仪器

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