毛细管电泳仪紫外检测器提高灵敏度的方法
毛细管电泳仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。
CE分析的关键问题是检测,紫外检测器是基于物质对紫外吸收进行检测,在CE中应用广。由于紫外检测池的光路长度为毛细管内径,一般不超过100μm,圆柱形毛细管作为光学表面不够理想,限制了紫外检测器的灵敏度,可采用优化测定波长、减少检测噪音和扩展吸光光路长度等方法来提高灵敏度。
一、优化测定波长:
通过测定不同波长下的信噪比来选择测定波长,以提高灵敏度。
二、减少检测噪音:
1、提高光源强度。
2、采用聚焦和狭缝等减少背景光的影响。
3、采用良好的信号放大系统。
三、扩展吸光光路长度:
1、为了克服圆柱形毛细管表面引起的散射、失真等不利的光学特性和增加光路长度,可采用矩形、扁形、Z形和泡型等特殊毛细管。当然柱效会有所下降。
2、对于普通毛细管,可采用轴向照射和多次反射来增加光路长度。
(1)轴向照射:将激光光束从毛细管末端沿管轴方向入射,在毛细管侧面进行检测。
(2)多次反射:在毛细管壁镀上银,分别开入射窗和出射窗。当入射光以特定角度入射后,在毛细管内反射30~40次后从出射窗口射出。
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