比率数据计算

比率数据分析提供了背景校正和FRET的440–480nm和565–625nm数据的直接对比。同一细胞的数据结果可以在极化和非极化状态下进行对比。图2所示是来自FLIPR^TETRA系统的一组数据示例。

在相同的数据窗口中，检测了加样前和加样后40-60秒的平均信号值。不含细胞的记录孔中平均信号值在统计时作为基线校准值（baseline corrected values，BLC）被去除。每一个孔中都通过加入去极化效应试剂后的RFU值除以初始RFU值来计算反应背景校准的标准比率值（R / Ro）。

去极化和极化状态下的发射光比率：

Emission RatioPolarized = BLC 440–480initial/BLC 565–625initial

Emission RatioDepolarized = BLC 440–480final/BLC 565–625final

The response ratio is calculated as:

R/Ro= Emission RatioDepolarized/Emission RatioPolarized

结果

使用FLIPRTETRA 系统进行检测发现氯化钡抑制大鼠嗜碱性白血病细胞上Kir的IC50是270μM。 这个结果是用过在Graphpad Prism®软件上采用4参数曲线计算得到的。传统膜片钳得到的数据结果2的IC50是500μM。作为对FLIPRTETRA 系统进行的实验的整体表现的评价，在IC80水平下计算的Z因子是0.58。Z因子是一个比较和评估实验质量并用来优化实验的工具。3 Z因子 > 0.5时被认为是一个有效的实验。

结论

FLIPRTETRA系统配置了390–420nm激发光源LED和440–480nm及565–625nm滤光片，有效地进行了比率检测的电压敏感探针实验。IC50结果与传统膜片钳技术的结果是一致的。比率法染料的实验和FLIPRTETRA系统，连同其它膜电位试剂一起，是重要的离子通道功能检测和实验研究的工具。多种用户可自行更换的LED模块和滤光片结合比率法染料以及实时记录的96孔和384孔记录模式提供了非常灵活多样的离子通道和转运体引起的膜电位改变的检测。

参考文献：

1. M. Falconer, et al. High-throughput screening for ion channel modulators.

J Biomol Screen Volume 7, (5)460–465 (2002).

2. J. Gonzalez, et al. Cell-based assays and instrumentation for screening ion- channel targets. Drug Discovery Today 4(9): 431–439 (1999).

3. J. Zhang, et al. A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high-throughput screening assays. J Biomol Screen Vol. 4, (2)60–73 (1999).