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甲基化和异戊烯化作用的检测实验_羧基甲基化的证实

2019.4.03
实验材料

细胞

试剂、试剂盒

甲基甲硫氨酸

仪器、耗材

SDS-PAGE

实验步骤

1. 用 100 μCi/ml 的 [3H] 甲基甲硫氨酸标记细胞(约 1X107)。

2. 用放射免疫沉淀和 SDS-PAGE 分离目的蛋白。

3. 荧光光谱法观察,切下蛋白带,放在一个 0.5 ml 的微型离心管中。

4. 加 100 μl 的蒸馏水,当凝胶片膨胀时,去掉纸支持物。

5. 加 200 μl 的 1 mol/L NaOH 到含有凝胶片的试管中。

6. 立即将试管放到闪烁瓶中,用部分闪烁液填充(在 20 ml 小瓶中加 2.5 ml 即可),拧紧螺帽。

7. 37℃ 保温 24 小时。

8. 从小瓶中取出试管,再加 7.5 ml 闪烁液,计数样本的放射性。

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