植物组织直接PCR
实验概要
本实验以拟南芥叶片为试材介绍了一个不用提取DNA直接进行PCR的简单方法。
主要试剂
0.25N NaOH
0.25N HCl
NP-40缓冲液:0.5N Tris-HCI, pH8.0 ,25% NP-40
实验步骤
1. 取面积约为lmm2的植物叶片放在500ul离心管中,加入40ul的0.25N NaOH,在沸水中煮30秒。
2. 取出小离心管,再加40ul 0.25N HCL和20ul 1 NP-40缓冲液(0.5N Tris-HCL, pH8.0 25%NP-40 ),沸水中煮2分钟。
3. 室温下于12000g离心1分钟。弃上清。
4. 加入PCR反应混合液。
5.0ul 10xPCR缓冲液(0.2M Tris-HCL, pH8.3, 15mM MgCL O. 5M KCL,1%明胶)
5.0ul 10xd NTPs(2mM储液)
2.5ul引物1 (10pmol/l)
2.5ul引物2 (10pmol/l)
0.2ul Taq酶(l0u/ul)
34.8ul双蒸水。
5. 以50ul液体石蜡覆盖。在PCR仪上进行反应。
6. 通过琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物。
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