酵母遗传学方法11：PCR介导基因破坏法
PCR介导基因破坏法
1．反应混合物：
5μl 10×Taq缓冲液
5μl 25mmol/L MgCl2
2μl 10mmol/L dNTPs
10~100ng 模板DNA
25pmols 引物（每种引物）
0.5μl Taq DNA聚合酶（2U）
2．PCR循环参数：
94℃ 5分钟
94℃ 1分钟
55℃ 1分钟
72℃ 2分钟
10个循环
94℃ 1分钟
65℃ 1分钟
72℃ 2分钟
20个循环
72℃ 10分钟
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PCR介导基因破坏法
1．反应混合物：
5μl 10×Taq缓冲液
5μl 25mmol/L MgCl2
2μl 10mmol/L dNTPs
10~100ng 模板DNA
25pmols 引物（每种引物）
0.5μl Taq DNA聚合酶（2U）
2．PCR循环参数：
94℃ 5分钟
94℃ 1分钟
55℃ 1分钟
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