（ 3 ）鲜血琼脂培养基
将灭菌的普通琼脂培养基冷却至 50 ℃ 左右，加入无菌的绵羊或家兔脱纤鲜血达 5 ％（即每 100 ml 普通琼脂加入鲜血 5 ～ 6 ml ），混合后，分装灭菌试管立即摆成斜面或倾注于平皿内（如果琼脂温度过高，鲜血加入后则成紫褐色，温度过低，则鲜血加入琼脂易凝不易混合。注意，混合时切勿产生气泡）待凝固后，置 37℃ 培养 24h ，无菌检验合格方可应用。
无菌血液是用无菌操作方法采自健康动物，通常是绵羊或家兔的血液，加到盛有 5 ％灭菌枸橼酸钠或 3 ％灭菌肝素的 100 ml 三角瓶内，或加到盛有玻璃小珠的灭菌三角瓶内摇动脱纤后置冰箱中待用。
[ 细菌培养 ]
取实验斜面或平板上的单胞菌株，于普通平板或鲜血平板上分区划线，以得单菌落，观察普通平板和鲜血平板上细菌的生长表现，观察的主要内容有：
（ 1 ）大小：其大小以 mm 表示，微小菌落：针尖大，直径小于 0 . 5mm ，如支原体菌落、猪丹毒杆菌菌落；小菌落：直径在 0 . 5 ～ 1 mm 之间，如嗜血杆菌、布氏杆菌菌落；中等大小的菌落：直径在 1 ～ 3 mm 之间，如巴氏杆菌、沙门氏杆菌菌落；大的菌落：直径大于 3mm ，如炭疽芽孢杆菌菌落等。
（ 2 ）形态：圆形，不规则形（根状、树叶状）
（ 3 ）边缘：整齐，不整齐（锯齿状、虫蚀状、卷发状）
（ 4 ）表面：光滑、粘液状、粗糙、荷包蛋状、漩涡状、颗粒状
（ 5 ）隆起度：隆起，轻度隆起，中央隆起，平升状、扁平状，脐状（凹陷状）
（ 6 ）颜色：无色、灰白色、白色、金黄色、红色、粉红色
（ 7 ）透明度：透明、半透明、不透明
（ 8 ）溶血性： β －溶血（完全溶血）， α －溶血（不完全溶血），不溶血
挑单菌落接种于普通琼脂平板 28 ℃ ， 24 h 培养或接种于盛肉汤的三角烧瓶中， 150 rpm ， 28℃ ， 18 － 24 h 振荡培养。注意观察培养物的浑浊度（轻度浑浊、中度浑浊、浑浊）、沉淀物的性状（颗粒状、絮状、粘稠状）、培养基表面是否形成菌膜、菌环以及培养物的颜色等。
2 ．菌液稀释
三角烧瓶中的液体培养物用生理盐水直接倍比稀释至适当的浓度，平板上的细菌用涂布棒刮下并用生理盐水冲洗掉，稀释到一定浓度，并用紫外分光光度计或麦氏比浊管法检测（事先可确定一条比色浓度与细菌含量之间的关系曲线）。
3 ．细菌接种
试验鱼人工感染的接种方法目前最常用的有浸泡、口服、注射、涂抹等，究竟选用哪一种方法最合适，需要根据不同的疾病类型和可能的侵入途径而定。如体表的病，可采用浸泡法：是体内的病，可采用口服、注射等。接种动物的细菌用量是个问题。接种量过大，即使该菌为非病原菌，可能会因大量菌体裂解释放的大量内毒素致死动物，并无细菌繁殖致病的过程。问题的关键是要测定所分离的细菌对接种动物的半数致死量（ LD 50 ），根据 LD 50 的大小来判断其致病力的强弱，进而判断其是否为病原菌。这也适用于区分同种细菌不同菌株致病力的差异。一般的接种剂量为 50LD 50 。