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流式细胞仪荧光信号等相关内容

2021.8.05

  在实际使用中,仪器首先要对光散射信号进行测量。当光散射分析与荧光探针联合使用时,可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。光散射测量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群。

  荧光信号主要包括两部分:①自发荧光,即不经荧光染色细胞内部的 荧光分子经光照射后所发出的荧光;②特征荧光,即由细胞经染色结合上的 荧光染料受光照而发出的荧光,其荧光强度较弱, 波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在 免疫细胞化学等测量中,对于结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键。一般说来,细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例核黄素、 细胞色素等)的含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞的比例越高,自发荧光越强。

  减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是:①尽量选用较亮的 荧光染料;②选用适宜的激光和滤片 光学系统;③采用电子补偿电路,将自发荧光的本底贡献予以补偿。

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