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黄曲霉毒素AF的快速检测技术

2019.9.05

黄曲霉毒素:

AF是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃环和香豆素的衍生物。目前已发现20多种。B1是最危险的致癌物,荧光特性 : 紫外线下 B1B2 发蓝色荧光,G1G2发绿色荧光。

 

黄曲霉毒素AF的快速检测技术:

免疫亲和柱-荧光分光光度计法和免疫亲和柱-HPLC法 。

(1)分析原理:免疫亲和柱试用大剂量的黄曲霉毒素的单克隆抗体固化在水不溶性的载体上,然后装柱而成。试样中AF用一定比例的甲醇/水提取,提取液经过过滤稀释后,用免疫亲和柱净化,以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度,然后用荧光分光光度计进行定量。也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分加入HPLC中,对黄曲霉毒素B1B2G1G2分别进行定量分析;

(2)ELISA法测定黄曲霉毒素B1 原理:将已知抗原吸附在固态载体表面,洗除未吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品提取液的混合液,竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物,洗除多余抗体成分,然后加入酶标记对抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体复合物结合,再加入酶的底物。在酶催化下底物降解,产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量。推出被测样品中抗原量。抗体:抗黄曲霉毒素B1的特异性单克隆抗体或抗血清包被抗原:黄B1与载体蛋白结合物,酶标二抗:羊抗鼠IgG与辣根过氧化酶结合物;

(3)微柱筛选法:原理:样品提取液通过由氧化铝与硅镁吸附剂组成的微柱层析管,杂质被氧化铝吸附,黄曲霉毒素被硅镁吸附剂吸附,在波长365nm紫外灯下显示蓝紫色荧光环,其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的浓度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附层未出现蓝紫色荧光,则样品为阴性(方法灵敏度为5~10ug/kg )。由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素B1,B2,GI,G2,所以测得结果为总黄曲霉毒素含量。


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