挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有
可能原因:
1.PCR扩增的是假克隆,因为PCR验证的可靠性不稳定。
2.质粒中酶切位点变异
你可以做如下实验:
1.看重组质粒的大小是不是比原始质粒大
2.用提出的质粒做pcr,这样比较可靠,用细菌做pcr的假阳性极高
3.用别的酶再试一下,是否能切出目的片段。
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可能原因:
1.PCR扩增的是假克隆,因为PCR验证的可靠性不稳定。
2.质粒中酶切位点变异
你可以做如下实验:
1.看重组质粒的大小是不是比原始质粒大
2.用提出的质粒做pcr,这样比较可靠,用细菌做pcr的假阳性极高
3.用别的酶再试一下,是否能切出目的片段。