红霉素的检查方法

碱度取本品0.10g,加水150m1,振摇,依法测定(通则0631),pH值应为8.0~10.5。有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定pH8.0磷酸盐溶液取磷酸氢二钾11.5g,加水900ml使溶解,用10%磷酸溶液调节pH值至8.0,用水稀释成1000ml 供试品溶液取本品约40mg,置10m1量瓶中,加甲醇ml使溶解,用pH8.0磷酸盐溶液稀释至刻度,摇匀。对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中用pH8.0磷酸盐溶液-甲醇(3:2)稀释至刻度,摇匀。系统适用性溶液(1)取红霉素标准品约40mg,置10ml量瓶中,加甲醇4ml使溶解,用pH8.0磷酸盐溶液稀释至刻摇匀。系统适用性溶液(2)取红霉素系统适用性对照品omg,置10ml量瓶中,加甲醇4ml使溶解,用pH8.0磷酸盐溶液稀释至刻度,摇匀。灵敏度溶液精密量取对照溶液适量,用pH8.0磷酸盐溶液甲醇(3:2)定量稀释制成每1ml中约含4g的溶液色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂( XTerraRPC18柱,4.6mm×250mm,3.5pm或效能相当的色谱柱);以乙腈-0.2mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节pH值至0)-水(35:5:60)为流动相A,以乙腈-0.2mol/L磷酸氢二甲溶液(用磷酸调节pH值至7.0)-水(50:5:45)为流动相先以流动相A等度洗脱,待红霉素B洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度洗脱;流速为每分钟1.0ml;柱温为65℃;检则波长为210nm;进样体积100ml时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)100100tat100tg+10tg+200注:tkg为红霉素B的保留时间 系统适用性要求系统适用性溶液(1)色谱图中,红霉素A峰的拖尾因子应不大于2.0。系统适用性溶液(2)色谱图,应与红霉素系统适用性对照品的标准图谱一致,红霉素A峰的保留时间约为23分钟,杂质A杂质B杂质C杂质D、杂质E与杂质F的相对保留时间分别约为0.4、0.5、0.9、1.2.3和1.8,红霉素B与红霉素C的相对保留时间分别约为1.7和0.5,杂质B峰与红霉素C峰、红霉素B峰与杂质F峰间的分离度应不小于1.2,杂质C峰与红霉素A峰间的分离度应符合要求。灵敏度溶液色谱图中,主成分色谱峰高的信噪比应大于测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,杂质C峰面积不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%),杂质E与杂质F校正后的峰面积(乘以校正因子0.08)均不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0%),杂质D校正后的峰面积(乘以校正因子2)不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0%),杂质A、杂质B及其他单个杂质的峰面积均不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0%),各杂质校正后的峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的7倍(7.0%),小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计。硫氰酸盐照紫外可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液取本品约0.1g,精密称定,置50ml棕色瓶中,加甲醇20m溶解,再加三氯化铁试液1ml,用甲醇稀释至刻度,摇匀对照品溶液取105℃干燥1小时的硫氰酸钾2份,各约0.1g,精密称定,分别置两个50m量瓶中,加甲醇20ml溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,置50ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,再精密量取5ml,置50ml棕色瓶中,加三氯化铁试液1ml,用甲醇稀释至刻度,摇匀空白溶液量取三氯化铁试液1ml,置50ml棕色瓶中,用甲醇稀释至刻度。测定法取供试品溶液、对照品溶液与空白溶液,在492nm的波长处分别测定吸光度(均应在30分钟内测定),两份对照品溶液单位重量吸光度的比值应为0.985~1.015。限度硫氰酸盐的含量不得过0.3%。硫氰酸根与硫氰酸钾的分子量分别为58.08与97.18水分取本品约0.2g,加10%的咪唑无水甲醇溶液使溶解,照水分测定法(通则0832第一法1)测定,含水分不得过6.0%。炽灼残渣不得过0.2%(通则0841)红霉素组分照高效液相色谱法(通则0512)测定供试品溶液取本品约40mg,精密称定,置10m量瓶中,加甲醇4ml使溶解,用pH8.0磷酸盐溶液稀释至刻度,摇匀。标准品溶液(1)取红霉素标准品约40mg,精密称定,置10ml量瓶中,加甲醇4ml使溶解,用pH8.0磷酸盐溶液稀释至刻度,摇匀。 标准品溶液(2)精密量取标准品溶液(1)1ml,置100ml量瓶中,用pH8.0磷酸盐溶液-甲醇(3:2)稀释至刻度,摇匀。pH8.0磷酸盐溶液、系统适用性溶液(1)、系统适用性溶液(2)、色谱条件见有关物质项下系统适用性要求除灵敏度要求外,其他见有关物质项下测定法精密量取供试品溶液与标准品溶液(1)、标准品溶液(2),分别注入液相色谱仪,记录色谱图。限度按外标法以标准品溶液(1)中红霉素A的峰面积计算供试品中红霉素A的含量,按无水物计,不得少于93.0%;按外标法以标准品溶液(2)中红霉素A的峰面积计算供试品中红霉素B和红霉素C的含量,按无水物计,均不得过3.0%。