转膜时间太长，小蛋白会不会从膜中穿过
影响因素应该有很多；一、首先需确定目的蛋白是否在胶上：跑完电泳可以先考马斯亮蓝染胶，如果在marker的指示下看到了目的蛋白的清晰条带，基本可以确定蛋白已经在胶上跑开。二、膜的准备：1.根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔径的pvdf膜。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。通常用0.45μm和0.2μm两种规格的pvdf膜。大于20kd的蛋白可用0.45μm的膜，小于20kd的蛋白就要用0.2μm的膜了，如用0.45μm的膜就会发生“blowthrough”的现象。pvdf膜灵敏度、分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高，非常适合于低分子量蛋白的检测。2.pvdf膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡饱和1-5秒钟，以使表面基团活化，有利蛋白结合。三、三明治做好后放入已经加入转膜液的转膜槽，连接电极，方向是胶负膜正。转膜过程在4度冰箱中或置入冰水浴中进行。四、时间和电压或电流依照分子量大小：分子量越大，时间越长，电压或越大。转移时间一般为1.5
小时，(
1ma-2ma/cm2，10%
gel)，可根据分子量大小调整转移时间和电流大小。本人觉得17kd的蛋白可以试试恒压90v40min。仅供参考。
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