总流程：

超纯水冲洗柱——流动相分离样品——超纯水冲洗柱——纯乙睛保存柱

1.电源准备
打开稳压器()电源开关，须待电压指示至220V后，才能开启其他有关设备。

2.HP1100高效液相色谱仪的准备
试剂：三氟乙酸
乙腈(Fisher公司产品色谱纯)
超纯水(Millipore超纯水)
冰乙酸
溶液配置：贮液瓶与流动相的准备
A液0.1%三氟乙酸(三氟乙酸1ml，超纯水999ml)室温保存
B液60%乙腈(乙腈600ml，超纯水400ml)室温保存
样品液0.01%乙酸(冰乙酸10l超纯水100ml)室温保存
泵头冲洗液：精滤后超纯水或者是1%色谱纯甲醇室温保存
注：贮液瓶应用超纯水淌洗干净，备用。
流动相溶剂用洁净G4玻沙漏斗精滤除去微小颗粒(目前未滤过溶液)。
操作者必须清楚并注明A、B贮液瓶盛装为何种溶剂。
冲洗泵头：用注射管于软塑料管末端抽吸至有水流出，调节流速开关控制流速为20-30drop/min.(目前我们很少冲泵头。)
①流动相管道排气
如果，管道中气泡较多，可通过弹击管道，排除气泡，并逆时针旋转脱气泵活塞使其松动，用注射管于流动相出口的塑料管末端抽吸至管道内气泡排除完全。操作时，我们通常已经打开了脱气机(气泡严重影响分离效果，所以观察管道中液体是否有气泡非常重要。)
②开机
③进入HP1100操作系统
a.双击WIN-95操作界面中左下角Instrument1online图标，进入HP1100工作站软件操作界面。单击工作站操作界面上方Runcontrol菜单，在下拉菜单中找到SampleInfo子菜单，单击。在SampleInfo信息框内定义操作者、样品前缀及编号、保存路径等参数。在保存路径项下，将可定义子目录分别输入操作者拼音缩写，以方便检索时互不干扰。
b.等待工作站操作界面中泵、柱温箱、检测器各指示图标由灰色转变为绿色后，单击泵、检测器各图标可从其各自弹出的菜单中设定流动相各溶剂比例、流速等。
(1)流速通常为1ml/min。检测波长通常为280，或者254nm。
(2)A液设置为100%，运行15-30分钟(目的是色谱柱的预平衡)，观察基线走势，基线应为直线，通过单击“Balance”键可将基线调至零点。待基线平稳后可进样。
(3)调整A液为0，B液为100%再运行60分钟(此时乙腈实际浓度为60%)
(4)在A液冲洗同时进行进样环的冲洗：用500ul的针样注射器，在load状态，注入超纯水500ul。(反复三次，若是20ul进样环，则加入20ul以上，多余的水可废液管流出。通常同一样品上样30次后应冲洗进样环，如果不同样品，最好，每次上样前均进行冲洗。)
(5)吸取一定量可直接进样的样品溶液(上样液最好用滤器滤过)，将进样阀逆时针旋至Load档，将进样针从进样孔处水平推入，按进样器活塞将样品溶液注射入进样环后，立即将进样阀顺时针方向旋至Inject档，与此同时，数据开始自动收集。
(6)此时样品分析已经完成。在HP1100主操作界面的检测器图标，关闭检测器，然后关闭色谱仪主机检测器开关(目的是延长检测器寿命)。将B通道调为0，A通道调为100%，即A液冲洗色谱柱约10-30min。用A液续冲洗色谱柱约10-30m(目的是冲出柱内残留的杂质)
(7)A通道换为C通道(100%乙腈)续冲洗色柱约10-30min。(目的主要为保护柱)
④数据记录的终止与保存
电脑将自动收集并保存数据，终止运行后，将自动弹出数据框，或者可通过DATAANALYSIS菜单，调出资料。

3.图谱处理

4.关机
1)HP1100的关闭
在HP1100的主操作界面上分别单击关闭泵、检测器图标，或通过菜单关闭。然后，单击HP1100的主操作界面右上方“X”，退出Instrument1online程序，返回至WIN-95操作界面。单击左下角“Start”菜单，单击“Shutdown”,等待关机，待出现“Restart”提示后，按电脑主机电源键，关闭电脑主机及显示器。
将所有使用仪器用布盖好。关闭排气扇、空调与稳压器开关。
2)清洁卫生
实验完毕后，打扫仪器室桌面与地面清洁，保持桌面整洁。
3)仪器使用记录
记录当天的仪器使用情况于指定记录本上，包括仪器使用起止时间与出现问题的解决方案，并签上操作者的名字。