实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质:
2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。 3.时收集上清液(含有释放的 cDNA 标签) 4.用 LoTE 扩容到 200mL。 5.等体积的 PCI 抽提,乙醇沉淀(实验方案 A,第 2 步)。 6.将冲洗和风干后的沉淀重新悬浮于 10 ul LoTE 中。 实验方案 B1.从 PCR 试管中移去连接反应混合物并用 50ul 洗液洗涤 1 次。 2.从试管中移去冲洗液,加入 50 ul 的 1X 限制性缓冲液,然后移去限制性缓冲液。 3.向试管中加入下列物质:
4.在 65°C 下消化 lh。 5.加入 175ul 的 LoTE 然后转移到 1.5 ml 的 Eppendorf 试管中。不要丢弃,因为混合物中含有所释放的附着于接头上的 SAGE 标签。 6.如上所述,用等体积的 PCI 抽提,乙醇沉淀(实验方案 A,第 2 步)。 7.将冲洗和风干后的沉淀重新悬浮于 21.5ul 的 LoTE 中。 展开 |