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标签酶消化释放标签实验

2019.3.28
试剂、试剂盒

溶液与缓冲液LoTE

仪器、耗材

Eppendorf 试管

实验步骤

实验方案 A

1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质:

2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。

3.时收集上清液(含有释放的 cDNA 标签)

4.用 LoTE 扩容到 200mL。

5.等体积的 PCI 抽提,乙醇沉淀(实验方案 A,第 2 步)。

6.将冲洗和风干后的沉淀重新悬浮于 10 ul LoTE 中。

实验方案 B

1.从 PCR 试管中移去连接反应混合物并用 50ul 洗液洗涤 1 次。

2.从试管中移去冲洗液,加入 50 ul 的 1X 限制性缓冲液,然后移去限制性缓冲液。

3.向试管中加入下列物质:

4.在 65°C 下消化 lh。

5.加入 175ul 的 LoTE 然后转移到 1.5 ml 的 Eppendorf 试管中。不要丢弃,因为混合物中含有所释放的附着于接头上的 SAGE 标签。

6.如上所述,用等体积的 PCI 抽提,乙醇沉淀(实验方案 A,第 2 步)。

7.将冲洗和风干后的沉淀重新悬浮于 21.5ul 的 LoTE 中。

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