细胞固定切片和包埋实验
哺乳动物肌梭的初级终末—使 用 1 um 连续切片的光学显微镜研究实验
实验材料 | 猫 部分显露肌梭 |
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试剂、试剂盒 | 二甲砷酸钠缓冲液 戊二醛 四氧化锇 乙醇 环氧乙烷 甲苯胺蓝 派罗宁 |
仪器、耗材 | 玻片 |
实验步骤 |
一、固定
二、脱水和包埋
三、切片和染色
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结果
猫的薄短筒状肌内肌梭的初级终末占据肌梭中部,大约长 350 mm,为了完整地观察肌梭,约需观察 50 张 1um
厚的纵向连续切片。通常认为肌梭的初级终末由单根 Ia
类初级传入纤维发出的外周终末分支及有髓或无髓纤维的终末前分支系统构成,这些有髓或无髓纤维的终末分支常分布于梭内肌纤维。梭内肌通常由六根三类不同的肌纤维构成。图
1-3 所示是使用 100 倍的消色差油镜(NA=1.25) 拍摄的照片;尺寸小于 0.5/um
的结构大部分已因溶解而丢失了。每个视野有一段长超过 100 啤的肌梭。照片中所见到的最显著结构是一根梭内肌纤维的中间部,就是核袋纤维。:
在初级终末区,梭内纤维的肌小节几乎全被聚集的胞核取代(图 1-3C 中的 n)。纤维表面的突出物是感觉终末(图 1-3F 中的
t)。在这些切片上都能见到有髓(图 1-3B 中的 mpt) 及无髓(图 1-3E 中的 pt)
感觉纤维的终末前分支部分。终末内的暗结构主要是线粒体。几个附属的、纤维母细胞样的细胞围绕在核袋纤维的周围并形成鞘-图 1-3 G
是基于相邻的连续切片重塑的、表面有感觉终末附着的核袋纤维的轮廓图。Banks 于 1986 年发表了完整终末的三维重塑图,1997 年
Banks 等人又将相似的连续切片分析法应用于初级终末的多编码位点以及与肌收缩控制器(pacemaker) 相互作用的组织-生理学相结合的研究。
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项目成果