（1）测序所用模板DNA的量一般按下面要求加入：

　　模板种类/长度 模板量

　　200 bp（PCR产物）：16 ng（120 fmol）

　　3000～5 000 bp（超螺旋质粒DNA）： 4 mg（2 pmol）

　　48 000 bp（λ,粘粒DNA）： 1 mg（31 fmol）

　　由于超螺旋质粒产生的信号比松弛的线性双链DNA弱，因此使用超螺旋质粒作为模板时其用量要比其它模板大一些。

　　（2）计算与4.5 pmol相当的引物纳克数可用以下一般公式：

　　4.5 pmol=1.5 ng×n，其中n为引物碱基数

　　计算与1p mol相当的引物微克数可用以下一般公式：

　　dsDNA：1 pmol=（6.6×10mg）×n，其中n为模板碱基对数

　　ssDNA：1pmol=（3.3×10mg）×n，其中n为模板碱基数

　　（3）为阻止Taq DNA聚合酶延伸非特异性退火引物， 热循环仪必须预热至95℃。温度变换应越快越好。下面的循环时间不包括变温时间。如果你无法确定使用何种模式，建议从模式1开始。

　　模式1：适用于引物<24碱基或GC含量<50%

　　95℃ 2分钟，然后： 95℃ 30秒（变性），42℃ 30秒（退火），70℃ 1分钟（延伸）。

　　模式2：适用于≥24碱基或略短的GC含量≥50%的引物。

　　95℃ 2分钟，然后：95℃ 30秒（变性），70℃ 30秒（退火/延伸）。

　　（4）在加入终止溶液之后样品可在4℃保存过夜。