亮氨酸氨肽酶的测定实验
基本方案
实验方法原理 | |
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实验材料 | 酶样品 |
试剂、试剂盒 | Tris-HCl 氯化镁 亮氨酸 亮氨酰 |
仪器、耗材 | 分光光度计 |
实验步骤 |
实验所需「试剂」具体见「其他」 1. 加样 2. 计算 25℃ 时,于 238 nm 处吸收值降低。 空白对照用 0.8 ml 0.0625 mol/L 亮氨酸代替亮氨酰,并且忽略实验混合物中的水量。 于 238 nm(am=吸收值/亮氨酰浓度)处,借助于校准曲线可测得酶的活性。
收起 |
注意事项 | |
其他 |
试剂: 0.5 mol/L Tris-HCl,pH 8.5 0.025 mol/L 氯化镁(MgCl2·2H2O,Mr=161.9;40.5 mg 溶于 10 ml 水中) 0.1 mol/L 氯化镁(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml 水中) 0.0625 mol/L 亮氨酸(Mr=131.2;820 mg 溶于 100 ml 水中,调至 pH 8.5) 0.125 mol/L 亮氨酰(亮氨酰盐酸,Mr=166.7;2.08 g 溶于 100 ml,调至 pH 8.5) 酶样品 [LAP(0.1 ml 约相当于 0.4 mg)必须在 37℃ 激活,在使用前先在 0.05 ml 0.025 mol/L MnCl2、0.05 ml 0.5 mol/L Tris-HCl pH 8.5、0.8 ml 水的混合物中培养 2 h] |