细菌的芽孢革孔雀绿染色和鞭毛染色
Ⅰ 细菌 芽孢染色
某些细菌在其发育的一定阶段可以形成一个内生孢子，即为芽孢。芽孢形成后并不脱离原细菌菌体，它的形状、大小和在菌体的位置都是一定的。老熟的芽孢可自菌体中脱落出来。芽孢结构上的特点是壁厚和细胞质浓厚，所以不易着色，通常多采用着色力强的染色剂和用加热等手段促使芽孢着色，并利用复染的方法对比原细菌菌体和芽孢，才易于在显微镜下看到它们。但是，若用简单染色法使菌体着色而芽孢无色也可以衬托出芽孢的形状、大小和位置。
【实验目的】
掌握细菌芽孢染色的方法。
【实验原理】
细菌的芽孢含水量少，脂肪含量高，芽孢壁较厚，对染料的透性差，不易着色，但是一旦着色又难以脱色。
通常，芽孢染色采用弱碱性染料孔雀绿在加热的条件下进行。染色完毕，用蒸馏水冲洗。因孔雀绿是弱碱性染料，与菌体结合力较差，因此易被水冲洗掉，而进入芽孢的孔雀绿却难于溶出。水洗后，再用一种呈红色的碱性染料复染，使菌体和芽孢呈现不同颜色。
【实验材料、药品及器具】
1、菌种 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)
2、染液 孔雀绿染液
藏花红染液
3、器皿 显微镜、酒精灯、镊子、洗净的载玻片4 片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、玻璃红、洗瓶装蒸馏水、接种环。
【实验步骤】
1、取培养24h左右的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌分别涂片、干燥、固定。
2、在涂片部分用吸水纸条盖住，然后向纸条滴加孔雀绿液至饱和。
3、将涂片逐渐加热至微冒蒸汽并不时添加染液以防止吸水纸条干燥。染色
2-8 分钟。
4、除去吸水纸条，用蒸馏水轻轻冲洗掉多余染液。
5、用藏花红染液复染30~60S。
6、水洗，风干或烘干后镜检。
【实验结果】
1、首先用低倍镜，再用油浸镜检查制片，注意芽孢的颜色和菌体的颜色。
2、绘制芽孢图。注意芽孢在菌体内的位置、大小和形状并绘制游离芽孢形态图。
【思考题】
1、为什么经孔雀绿染色后，水洗再复染红色染液只能染上菌体?
2、用革兰氏染色能否看到芽孢，为什么?
Ⅱ 细菌鞭毛染色
许多细菌自细胞内长出一至许多根细丝状附属物称为鞭毛。鞭毛是细菌的运动器官，有鞭毛的细菌均可运动。鞭毛细长透明，其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外，所以不易观察。但是在不染色情况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在。
【实验目的】
学习并掌握鞭毛染色的原理和方法。
【实验原理】
细菌的鞭毛非常纤细，直径一般在20nm左右，用电镜才能观察。本实验采用特殊染色法，即在染色前先经媒染剂处理，媒染剂吸附在鞭毛上，使鞭毛加粗，便可达到普通光学显微镜的辨析范围以内。染色后，即可利用普通光学显微镜进行观察。
【实验材料、药品及器具】
1、菌种 培养18-24h的菌种
大肠杆菌 (Escherichia coli)
普通变形杆菌(Proteus Vulgaris)
荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens)
2、染色液 鞭毛染色液甲
鞭毛染色液乙(实验前配好的新鲜染液)
3、器皿 显微镜、酒精灯、洗瓶装蒸馏水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、干净载玻片、玻璃缸、无菌水三管、灭菌长滴管三支。
【实验步骤】
1、用长滴管取无菌水轻轻移入长好菌种的试管内，培育20-30min使细菌自己慢慢游入水中并充分舒展其鞭毛，使水呈轻度混浊。
2、取一滴菌悬液滴于玻片的1/3位置上，然后轻轻抬起此端，使悬液缓慢流至玻片另一端，平放使其在空气中自然干燥固定。切忌用火焰烘干。
3、在涂片部位滴甲液，染色3~5min。
4、用蒸馏水轻轻冲洗。
5、加乙液染30~60s，可在酒精灯上稍稍加热。冲洗多余的染液。
6、制片干后检查。
【实验结果】
1、显微镜下检查鞭毛染成什么颜色和形状。
2、比较菌种鞭毛着生的位置、数目并绘图。
【思考题】
1、菌种的培养时间与鞭毛染色有什么关系?
2、你在显微镜下看到的鞭毛是否为原来的大小和形状?
3、鞭毛涂片与芽孢涂片有何区别?为什么?
