高效液相色谱之高效反相液相色谱（二）
附：色谱柱操作说明，（以迪马公司Diamonsil(TM)柱为例）
1. 色谱柱常规参数
订货号：Catalog.No. 产品ZL号 Serial No.
出厂日期 Date
填料 Column Paking 如，Diamonsil(TM)钻石C18 5цm
柱规格 Column Dimension 250×4.6mm
填料批号 Material Lot No. 0206
保证柱效 Guarantee Plate Number N>70,000/m(usp 1/2 Peak height)
不对称因子 Asmmetry Factor As=0.8-1.4(5% Peak height)
测试报告 （附色谱图） 略
2. 验收色谱柱
⑴ 检查色谱柱外观是否完好。
⑵按柱参数逐项检查是否与您的需求相符，如规格等。
3. 流动相使用
⑴检查色谱柱允许使用流动相及pH，如，凝胶柱常规用缓冲液，反相柱用有机溶剂，钻石C18柱允许pH为2-7.5。
⑵ 注意流动相的粘度对柱后的影响，如甲醇/水系统高于乙腈/水系统。
⑶ 流动相、样品使用时过滤，常用0.45μm膜，分清水溶性和脂溶性膜。一般在色谱柱口有0.2μm的膜保护，以免堵塞色谱柱。
⑷ 流动相应脱气。
4. 色谱柱安装
⑴ 确证柱与仪器的接头，管路匹配。
⑵ 安装柱之前，检查流路系统中的溶剂是否正常。
⑶ 为减少死体积使进样阀与色谱柱和检测器之间的连接管路内径尽量细，如0.01英寸。
5. 对样品要求
⑴ 样品应与流动相互溶。
⑵ 样品浓度要在一定范围内，不同色谱柱要求不同。
⑶ 样品中不能有不溶物，用前应用针头或过滤器过滤。
⑷ 样品不应与流动相发生反应。
6. 色谱柱的使用
⑴ 色谱柱最后封装的溶剂一般与检测报告相同或特别注明，若更换流动相时，流速要慢，一般不超过0.5ml/mim。
⑵ 请勿频繁改变流动相，否则，会加速降低柱效。
⑶ 注意不同色谱柱耐压程度不同，压力要在柱耐压范围内，为获得最佳分离效果，钻石C18柱使用勿超过200bar(300psi)。
⑷ 若使用保温柱时，注意温度影响。
7. 色谱柱的保存
⑴ 若流动相中使用盐或酸试剂，保存前应先用水冲洗干净（约20倍柱体积）。
⑵ 泵入保存液，不同色谱柱用不同保存液，钻石C18柱应尽可能用100%乙腈或甲醇保存。
⑶ 卸下色谱柱后，立即用接头密封，放在稳定环境中保存。
8. 柱的再生
不同柱用不同方法再生，请参看各种色谱柱说明。
钻石反相键合相C18、C8、pH、CN柱用以下程序：
用20倍柱体积的溶剂按下列程序冲洗色谱柱。（按箭头方向冲）
水→甲醇→氯仿→甲醇
水冲洗时可用热蒸溜水（55℃）或加入少量（0.8%）DMSO冲洗。
一般情况下不提倡反向冲洗色谱柱，必要时可反向冲。
