血细胞分离技术的操作程序

　　（一）材料与试剂

　　1．抗凝剂

　　（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml，市售肝素多为100U~126U／mg。

　　（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一种螯合剂。用生理盐水配制成4％的溶液备用。

　　（3）阿氏液（Alsever液），配方如下：

　　枸橼酸钠（Na3C6H5O7·5H2O） 0.80g

　　枸橼酸 0.0325g

　　葡萄糖 2.05g

　　氯化钠 0.42g

　　H2O 加至 100.00ml

　　混匀溶解后，114.3℃高压蒸汽灭菌10min备用。

　　阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂，又含有细胞生存的营养，所以它既可做抗凝剂，又可做血细胞的保存液。

　　2．针头 根据不同动物和采血部位，采用不同型号的针头，用前必须灭菌或消毒。

　　3．采血容器 注射器或三角瓶等。

　　4．采血动物。

　　（二）操作方法

　　1．采血法 各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血，猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血，家禽由翼下静脉或心脏采血，兔由心脏或耳静脉采血，犬由颈静脉或四肢静脉采血，豚鼠由心脏采血，小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。

　　2．抗凝 采集血液最关键的问题是抗凝，采用什么方法进行抗凝，则根据实验的要求和条件而定。最常用的方法如下：

　　（1）肝素抗凝：采血时，使每ml血液含15U~20U肝素即可。计算采集的血液量，按1 000U/ml的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血时，边采血边轻轻摇动，使抗凝剂和血液混匀。对于采少量的血液或小动物采血，可直接用注射器抽取一定量的肝素液，再采血直接抗凝。

　　（2）EDTA抗凝：采血前，用灭菌生理盐水将EDTA配制成4％溶液，然后按预采血液的量，以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液体量于采血容器内。采血，并不断摇动采血容器，使之混匀。

　　（3）玻璃珠法：预先将适量的玻璃珠（根据采血量多少而定）清洗后，装入采血容器中，灭菌后备用。采血过程中，边采边摇采血瓶，以使小玻璃珠在血液中滚动，以机械地除去纤维蛋白，使血液不能凝固。本法虽较麻烦，但对淋巴细胞的活性影响最小，且可减少血小板的混杂。

　　（4）阿氏液采血：以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液，边采边轻轻摇动采血瓶，使之混匀。用阿氏液采血，除了抗凝外，多用于红细胞的保存。一般在4℃条件下，阿氏液中保存的红细胞2周其活性和特性不变。