谈谈液相色谱系统的维护与保养
一、液相色谱流动相
保持贮液瓶清洁，定期清洗或更换；尽量使用HPLC级溶剂和试剂；含有缓冲盐和非HPLC级的流动相一定要过滤；含有缓冲盐的流动相应现用现配，防止微生物生长和组分改变。
1、更换流动相注意事项：
液相色谱常用的流动相包括多种有机溶剂、水、各种缓冲溶液等，它们之间存在互溶性的问题，同时也存在缓冲溶液盐析出的问题。
2、更换互溶性流动相将新流动相置于储液瓶中：
a. 打开放空阀，启动泵使新的流动相从放空阀出口流出20mL左右。
b. 关闭放空阀，然后将进样阀与色谱柱相连接端卸开，用小容器放置于进样阀的出口处。
c. 启动恒流泵，让流动相从进样阀出口流出10mL左右。
d. 重新连接色谱柱，设定适当流速，当流动相流出约30倍于色谱柱体积，并且检测器基线平衡后，流动相更换完毕。
3、更换非互溶性流动相：
a. 用中介溶剂更换泵中的旧流动相（不要接色谱柱）。
b. 如果色谱柱中流动相也需要更换，用该溶剂冲洗色谱柱。
c. 用新流动相更换中介溶剂。
4、更换缓冲液流动相：
a. 用5%～20%甲醇水更换色谱系统中缓冲液(包括色谱柱) 。(非常重要)
b. 用新流动相更换过渡溶剂。
c. 由于一般缓冲液遇到甲醇、异丙醇等高含量有机溶剂混合液时容易将缓冲液中的盐结晶出来，而结晶盐对密封圈、柱塞杆以及进样阀内部转子和定子都有很大的损坏，也容易阻塞输液管路，因此要特别仔细操作。
d. 用缓冲液作流动相或一段时间不使用泵，照以上步骤更换溶剂，然后用纯甲醇或乙腈冲洗。
二. 泵头
泵的密封圈是泵zui容易磨损的部件
1、泵的密封圈的维护保养：
每天要把泵中的缓冲液冲洗干净，防止盐沉积；用HPLC级试剂；用烧结不锈钢吸液过滤头；
2、进样阀
zui易磨损：转子密封
3、保养事项：
a、样品进样前要过滤；
b、停机后要用溶剂冲洗干净进样器内残留样品和缓冲盐；
c、不要用气相色谱用的尖头针进样。
4. 检测器
保持检测器清洁，每天与色谱柱一同清洗；
用脱过气的流动相，防止空气卡在检测池内；
检测器灯有一定寿命，不用时不要打开灯。但也不能
够经常开关灯。
三、液相系统常见故障排除方法
1、泵易出现的问题：
泵流速变小、柱压低或不吸液流量不稳或压力不稳漏液压力显示过高；泵流速变小、柱压低的原因泵内有气泡；溶剂过滤器阻塞；入口单向阀过滤片阻塞；泵中两种溶剂不互溶；柱塞密封泄漏；连接管路泄漏。流量不稳或压力不稳的原因泵头内聚集了气泡；泵中溶剂分层；泵头失灵；入口单向阀污染；输液管路漏液或部分堵塞。
2、漏液的原因
流动相从主副泵头清洗管流出：由于密封圈内环表面和柱塞杆表面粘有异物；流动相从泵头和定位套间漏液：密封圈外环密封不好；连接问题。
3、泵压力显示过高的原因
在线过滤器堵塞；进样阀堵塞；色谱柱本身压力增高；紫外检测器入口管路堵塞。
4、泵中气泡的排除
初次、长时间没有使用、流动相脱气效果不好等情况下系统内会出现气体，导致压力不稳、流速不稳甚至不能输液等问题。输液管中的气泡可通过用泵的冲洗功能或者用注射器在放空阀排出；如果输液管中无气泡，流路中仍然无液体流出，可能是阀球阀座粘连，取出单向阀，向单向阀两端分别吹气，一通一堵为正常，两端均堵说明阀球阀座粘连，需清洗阀球阀座。
5、在线过滤器及滤头的清洗
将在线过滤器和滤头拆下，浸入20-30%硝酸溶液中，超声30分钟，取出用水洗净既可。如果使用的是正相系统，注意将在线过滤器烘干后使用。
6、对柱塞杆的清洗
注意经常用蒸馏水冲洗柱塞杆后部的管路，避免盐结晶在上面，从而损伤密封圈和柱塞杆，导致泵体漏液。
7、单向阀清洗
取下密封垫，将阀球、阀座、限位套倒入盛乙醇的小烧杯中在超声波清洗器清洗阀组件(用放大镜观察清洗后的阀球、阀座，如果有损坏，请换新的阀球、阀座)；清洗后将阀件按要求装入阀体(注意每组阀座的方向)，在上面压住密封垫圈。每组阀球、阀座不能互换，否则影响密封性能。阀组装好后，可用吹气的方法检查安装的是否正确。从标记环一端吹气，空气可以通过阀体，而在另一端吹气，空气应无法通过阀体。
8 、检测时易出现的问题
a. 基线噪声
b. 基线漂移
c. 工作站出现大的尖峰
d. 负峰
e. 工作站信号阶梯式上升
f. 随泵运动出现噪声
g. 峰高或者峰面积重复性差
h. 分析准确度差
9、基线噪音
样品或检测池污染；样品或参比池中有气泡；记录仪或装置接地不良；检测器光源故障；连接件泄露；很小的气泡通过检测池；由泵的脉动引起的规则脉冲；有微粒通过检测池；进样阀样品环部分堵塞；氘灯寿命到限。
10、基线漂移
检测池污染；检测池内小气泡；柱污染或固定相流失；检测器温度变化；检测器光源故障；原先的流动相未完全置换；溶剂储瓶污染；强吸附的组分从色谱柱中洗脱下来；微粒造成进样阀柱头部分堵塞；溶剂分层。出现很大的尖峰检测池内有气泡通过-溶剂脱气并彻底冲洗系统；检查连接系统是否漏液；记录仪或检测器接地不良-消除噪声来源；确保良好接地；样品溶解不彻底-更换样品溶剂。
四、负峰
检测器输出信号的极性相反；样品的吸收小于流动相，流动相不纯；样品溶剂干扰；示差折光检测器中样品的折射率较低；进样中带入气泡。
1、信号阶梯式上升
检测器的输出范围设定不当-重新设定检测器的输出范围。记录仪或检测器接地不良-确保良好接地。吸收过大，平头峰-稀释样品。
2、基线随着泵的往复出现噪音，仪器处于强空气中或流动相脉动，改变仪器放置位置，放在合适的环境中。用一调节阀或阻尼器以减少泵的脉动。
3、峰高或峰面积重复性差
进样体积不重复-保证完全充满定量管；检测器响应不正常；记录仪或工作站不正常；柱或检测器被样品超载；校准液或样品溶液或内标物分解；保留时间不重复；溶质与固定相作用；色谱柱填充不良。
4、 分析的准确度差
校准不适当；校准液或样品溶液或内标物分解；对内标物或欲测组分有未知干扰；溶质与固定相作用。
