液相色谱法测定紫花苜蓿青贮中的有机酸
液相色谱法测定紫花苜蓿青贮中的有机酸
紫花苜蓿是豆科苜蓿属多年生草本植物，可以加工成苜蓿草粉，作为家畜配合饲料的主要原料使用，起平衡日粮氨基酸、提供丰富的维生素的作用，并提供纤维素。紫花苜蓿茎叶中含有丰富的蛋白质、矿物质、多种维生素及胡萝卜素，特别是叶片中含量更高。
苜蓿青贮或半干青贮，养分损失小，包括半干青贮，加甲酸青贮，拉伸膜青贮等三种技术紫花苜蓿（Medicago sativa）青贮之后，原料中的可溶性糖等在植物酶或微生物作用下，部分转化为乳酸、乙酸、丙酸、丁酸等有机酸，青贮饲料的PH下降，抑制有害微生物的繁衍。
乳酸的测定有蒸馏法、液相色谱法、酶法等，乙酸、丙酸、丁酸等挥发性脂肪酸的测定常用气相色谱法。本方案采用极性较强的离子交换色谱柱，用液相色谱仪对紫花苜蓿青贮饲料的浸提液进行有机酸测定，探讨了用液相色谱仪一次性测定乳酸和挥发性脂肪酸方法的可行性与准确度。
本方法样品处理过程简单，分离效果理想，相对标准差低，回收率好，具有良好的重现性和精密度，同时测定紫花苜蓿青贮浸提液中的乳酸、乙酸、丙酸、丁酸，约20min即可分离完全，所以用HPLC测定紫花苜蓿青贮饲料中有机酸更为简单、方便、快捷。
仪器
LC600B等度液相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司），包括LC600B高压恒流泵1台、SPD600B紫外检测器1台、SCL600B系统控制器1台、8725i手动进样阀1只、反控色谱工作站1 套（内置反控主机）、液相色谱柱1根等。
样品处理
准确称取20g紫花苜蓿青贮，加入200mL蒸馏水，均质1min，4层纱布过滤，滤液用试纸精滤，再用0.45μm滤膜过滤，浸提液待测。
色谱条件
色谱柱：Shodex KC-811色谱柱300mm×8mm
流动相：3mM高氯酸
柱温：50℃
检测波长：210nm
流速：1mL/min
进样量：5μL
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