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如何提高PCR的扩增效率

2021.8.14

P不出来,如果引物没有问题那就是反应条件没有设置好了

首先看看你所用的酶的效率(普通Taq酶的效率为0.8~1.2kb/s),延伸时间是不是太短了,再看看酶活性是不是还好,做个阳性对照

其次看看退火温度,是不是过高或者过低

再次看看你的模板,如果是基因组DNA,跑跑胶看看有没有降解,量加的够不够(基因组属于复杂模板,起始量应稍大一点),如果是RT产物,量又不能加太多,RT体系里的成分会抑制PCR反应

最后看看你的时间,一般初始变性2~5min,变性20s~30s,退火20s~30s,延伸视长度而定,终延伸7~10min

以上差不多是做PCR基本的东西,仅供参考

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