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细胞培养--细胞复苏的操作过程

2021.11.25

①将冷冻管从液氮中取出,迅速投入37℃水浴融化,细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率,复苏过程中一般细胞死亡率在20%~25%之间。

②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒,然后放置在冰浴上。

③小心开启瓶盖,把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中,然后把培养瓶移至培养箱,36℃~38℃培养1h,让细胞贴壁。

④细胞贴壁后,小心移弃培养基,主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、死细胞及其碎片,加5mL新鲜培养基,36℃~38℃培养。

⑤细胞培养24h后,更换新鲜培养基,继续培养直到形成单层,便可以传代。

⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。


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