全自动生化仪K值设定体会
【摘要】全自动生化仪测定酶时，多使用连续监测法。连续监测法通常使用二类反应指示物：一类为NAD (H)或NADP(H)，二类为色源性底物。应用第一类反应指示物测定的酶有ALT、AST、LDH、CK、 HBDH等，应用第二类反应指示物测定的酶有y-GT、ALP、AMY等。一般试剂盒说明书均有固定￡值及由此推导计算出F值，也称K值。常数K值的设定很重要，K值过高虽线性范围较宽，但重复性差，反之，虽然精密度好，但线性窄。K值设定的首要出发点是保证测定酶医学决定水平值结果的可靠，另外还应考虑到测定时间。一般认为监测时间短，误差相对较大；监测时间长，误差相对较小。监测时间长，K值可以设定相对大一些，如监测时间短，K值则应设定小些。如监测时间只有30s，K值不能超过4000。通过K值计算公式可以看出，改变K值最方便的途经就是改变样本稀释倍数，样本稀释倍数大，K值就愈大。一种酶测定的参数一旦确定，即测定时间，样本稀释倍数等一旦确定，K值即为一固定值，正确设置酶测定参数对K值设定置关重要。
【关键词】K值,样本稀释倍数,监测时间
1 样本稀释倍数对K值的影响
K=I/c~X 106X I／LX稀释倍数，从公式上可以看出样本稀释倍数升高或降低，K值随之升高或降低。如果ΔA／min以相同的比例升降，就不会影响最后结果，实际情况并不尽然。笔者发现酶测定，在一定样本稀释倍数内，ΔA／min呈线性变化，超过此范围ΔA／min不呈线性改变。样本稀释倍数过小，过高内源性干扰和边反应会使特异性下降；但样本稀释倍数过大，会使反应产生的信号太小，特别是低活性标本，仪器分析中信噪比增大，导致重复性下降。酶测定选用的样本稀释倍数是经过具体的实验研究，考虑了多方面的因素决定的，所以不能为了改变K值，而随便改变样本稀释倍数，如想改变，必须重作线性分析测定和各种限额参数的确定。如果K值过小，线性范围窄，仪器吸光度稳定，分辨率好，可以适当增加样本稀释倍数增大K值，但应观察是否在线性范围内。
2 监测时间对K值影响
K值计算公式中可以看出监测时间对K值没有影响，但监测时间影响ΔA／min，一般来说监测时间延长1倍，误差下降一半，反之监测时间缩短1倍，误差升高1倍。所以当K值较大，CV值升高时，我们可以延长测定时间，降低CV值。当然我们也不能为了降低误差而无限制延长监测时间，监测时间过长容易发生底物耗尽，超过线性范围，引起较大的误差。一般认为连续监测时间至少60～120s或不少于4个读点(3△A)。国内对速率法试剂盒的性能要求是线性时间不能低于3min，在3min内的监测时间，很少出现底物耗尽。如果监测时间只能设置为30s，K值一般不能超过4000，否则误差较大。
3 讨论：笔者认为虽然改变K值最方便的途经是改变样本稀释倍数，但样本稀释倍数的设定常需经过很多实验，如果实验设计不当，会影响结果可靠性，我们不能任意改变样本稀释倍数。一般来说，K值过小，线性范围太窄，经过实验分析，可以适当增加样本稀释倍数增大K值。K值过大，变异系数达不到国家规定RCV，则可以降低样本稀释倍数减少K值，也可以通过延长监测时间，降低ΔA／min误差，提高精密度。K值设定必须综合考虑各因素，分析参数的正确设置是K值设定的基础。酶测定各参数一旦确定，K值即为一固定值。但K值受许多因素的影响，如分析仪波长，波宽，比色皿光径和透光性，吸量与稀释准确度，pH等。如果条件允许各实验室应实测K值并进行校正。
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