中药药对虎杖 - 桂枝对急性痛风性关节炎的影响（一）

摘要：目的 研究中药药对虎杖-桂枝对急性痛风性关节炎的影响。方法  取雄性 SD 大鼠 48 只，随机分为 6组（每组 8 只），即正常对照组，模型组，秋水仙碱组（0.1 g·kg-）1，虎杖-桂枝低、中、高剂量组（3.5，7，14 g·kg-）1。正常对照组和模型组给予等量生理盐水，其他各组给予相应药物灌胃，每天 1 次，连续 7 d。于灌胃的第 4 天.模型组与各给药组大鼠右后踝关节注射 25 mg·mL-1 尿酸钠（MSU）0.2 mL 1 次，正常对照组给予同量的生理盐 水，观察各组大鼠不同时间点足趾容积的变化；第 7 天灌胃 1 h 后取血，ELISA 法测定血清白细胞介素 1β（IL-1β）、转化生长因子-β（TGF-β）含量，荧光定量 PCR 检测外周血单核细胞 Toll 受体 2（TLR2）、Toll 受体 4（TLR4）及髓样分化因子 88（MyD88）的表达。取血后处死动物，取右后踝关节进行病理学观察。结果 与模型 组比较，在造模后 2 h 和 6 h 虎杖-桂枝药低、中剂量组可显著减小大鼠足趾容积率，48 h 和 72 h 虎杖-桂枝 药对低、中、高剂量组大鼠足趾容积均显著减小，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。虎杖-桂枝药对各剂量组可不 同程度的减少关节滑膜炎症细胞浸润反应和血管充血程度。与模型组比较，虎杖-桂枝药对各剂量组可显著减 少 IL-1β 的含量，抑制 TLR2、TLR4 及 MyD88 基因的表达（P ＜ 0.01）。结论 虎杖-桂枝药对低、中、高剂量 组对急性痛风性关节炎大鼠具有显著的改善作用，其机制可能是通过影响血中 IL-1β 的水平，下调 TLR2、 TLR4、MyD88 基因的表达来发挥作用。

关键词：虎杖-桂枝药对；痛风性关节炎；TLRs/MyD88 通路；大鼠急性痛风性关节炎是由血液尿酸增高，尿酸钠（MSU）结晶沉积于关节滑膜及周围组织而引起的急性炎症反应 [1]。临床治疗痛风的药物主要为化学药，长期使用具有较大的副作用，中药长期使用毒副作用小，具有显著优势。既往研]表明，含有虎杖的复方对痛风具有明显疗效；桂枝及其提取物能拮抗多种急、慢性炎症反应，具有显著的抗炎作用。

本课题组  前期研究[3]发现，药对虎杖 - 桂枝对急性痛风性关节 炎具有显著的改善作用，但其作用机制仍未阐明。 MSU 晶体作为一种危险信号被细胞表面和胞质的模 式识别受体，如 Toll 受体 2 （TLR2）、Toll 受体 4 （TLR4）、CD14 等分子所识别，TLR2/TLR4 与病原 相关分子模型（PAMPs）结合后，其本身结构发生二 聚化，活化髓样分化因子 88 （MyD88）， 活化后的 MyD88 经过一系列的作用最终激活核转录因子 kappa B（NF-κB）以及后续白细胞介素 1β（IL-1β）的释放。 国内外研究[表明， 痛风出现的炎症发病机制与 TLRS/MyD88 信号转导通路密切相关。本研究通过建 立急性痛风性关节炎大鼠模型，探讨药对虎杖 - 桂 枝对急性性痛风性关节炎及 TLRS/MyD88 信号的影 响。

1 材料与方法

1.1 动物  SD 大鼠，雄性，SPF 级，体质量（200±20）g，广东省动物中心提供，动物许可证号：SCXK （粤）2008-0002。

1.2 药品及试剂 秋水仙碱，西双版纳药业有限责任 公司，批号：130313；尿酸钠，Sigma 公司，批号： BCBH7155V；虎杖、桂枝均购自康美药业，经本院 中药鉴定教研室李忠教授鉴定为真品。取虎杖、桂枝， 分别加 10 倍水， 浸泡 30 min， 虎杖煎煮 25 min，桂枝后下煎煮 20 min，过滤；药渣加 5 倍水， 煎煮 40 min，合并滤液，离心，上清液浓缩，定容， 灭菌，冷藏备用。MSU 溶液参考文献[2]方法制备。大鼠外周血淋巴细胞分离液，天津市灏洋生物制品科技 有限责任公司， 批号： LTS1083； Trizolf， 美国 intrivogen 公司，批号：15596-026。RNA 逆转录试剂 盒，Premix TapTM，SYBR Premix Ex TapTM Ⅱ ， 均为 宝生物工程（大连）有限（Takara）公司产品，批号分 别为：RR047A、RR901A、RR820A；白细胞介素 1β （IL-1β）和肿瘤坏死因子-β （TGF-β） Elisa 试剂盒， 均为美国昂飞公司（eBioscience）产品， 批号分别为 BMS630 和BMS623。

1.3 仪器 YLS-7C 足趾容积测量仪，北京众实迪创 科技发展有限责任公司；NanoDrop 2000c 型紫外分光 光度计、MuLTiskan Go 型酶标仪， 美国赛默飞 （Thermo）公司；Mastercycler 型 PCR 扩增仪，德国艾 本德（eppendorf）公司；DOLPHIN-1D 型凝胶成像分析 仪，美国威泰克（Wealtec）公司；VIIA7 型荧光定量 PCR 仪，美国应用生物系统（ABI）公司。