关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

ATP发光技术快速检测食品中菌落总数

2020.8.11

  【摘要】

  目的:探讨ATP发光技术快速检测菌落总数的可行性。方法比较ATP生物发光值与平板计数法对细菌总数进行检测。

  结果:检测结果相关性研究分析表明,两者在一定范围内具有显著相关性。

  结论:ATP生物发光法操作简便,应用范围广,可应用于对食品中菌落总数的快速检测。

  菌落总数是食品微生物国标检测中的一个重要指标,主要是作为判定食品被细菌污染程度的标志。在国家颁发的食品卫生标准和进口贸易中许多食品的卫生指标都有菌落总数的限量规定。常规的菌落总数检验方法(平板计数法)存在操作繁琐、测试周期较长及检测结果在实际生产的质量控制中意义不大等问题。ATP生物发光测定法是快速检测微生物的方法之一。本文对ATP生物发光测定法与平板计数法的相关性进行了研究分析,并对ATP生物发光测定法进行卫生学检测的可行性和可操作性进行探讨。

  1材料与方法

  1.1仪器与试剂

  ATP生物发光快速检测系统配套仪器及试剂(沈阳中科靓马生物工程有限公司生产),包括:滨松9505微量光度计、专用比色杯、发光反应试剂(LLR)、细菌细胞ATP释放试剂(XRA)。旋涡混合器。稀释用磷酸盐缓冲液(PBS)9ml试管分装10管(121℃高温高压灭菌)。固体营养琼脂培养基(121℃高温高压灭菌)。PE手套。大肠杆菌(ATCC25922—3,购于中国药品与生物制品检定所)。恒温摇床。台式离心机。

  1.2方法

  1.2.1实验准备

  计数前1天,用接种环刮取大肠杆菌斜面培养物一环接种到装有40mlLB的100ml三角瓶内,37℃振荡培养过夜。取上述培养物离心(10000r/min,1min)倒去上清液,沉淀用等体积PBS洗涤1次,用同样体积PBS悬浮,此即培养物原液。稀释:(假定培养物浓度约为1×106 cell/m1)用PBS将培养物做10倍递增稀释。

  1.2.2平板计数

  确定3个用于平皿计数的稀释梯度,保证至少1个梯度的计数在30~300范围内,吸取1ml加人到玻璃灭菌空培养皿中,每个梯度平行倒两个平板,同时做空白对照。于37℃温箱培养48h计数。选择菌落计数在30~300范围内均匀分散的释梯度作平板计数并取其平均值。

  1.2.3 ATP测光

  提前打开微量光度计屏幕显示RLU为“0”,用灭菌的移液管尖吸取50待测菌液,加入专用比色杯中。将比色杯放人微量光度计抽屉,手持XRA试剂瓶,向比色杯底垂直滴加两满滴XRA。用灭菌的100µl移液管尖,将50µl LLR加入杯中,和缓地吸挤3次,混匀反应液。保持抽吸时间、次数一致。并力求所有样品的这段操作时间一致。关上微量光度计抽屉,此时微量光度计自动进行荧光值测量,等微量光度计显示出荧光值后记录荧光值的大小。

  2结果

  2.1 ATP测定法与平板计数法试验结果

  两种方法测定细菌总数的两次平行试验结果见表1、表2。

  2.2 ATP测定法与平板计数法相关性

  依据表1、表2数据,以光值平均数的对数值为Y轴,平板计数平均数对数值为x轴,作x、Y散点图描绘关系曲线,Y=0.8834x—1.6807,R2=0.9778。从数据和散点可以看出,第一次试验的1O一、第二次试验的10-5、10 -6 3个梯度的值与其他值线性较差,在检测限以外。可以看出,在细菌数量10 cfu/ml以上范围内平板计数与生物发光值成显著相关。


推荐
热点排行
一周推荐
关闭