关于何时使用HILIC 与反相液相色谱柱的详细研究

　　摘要：本研究考察了何时使用亲水相互作用液相色谱 (HILIC) 以及何时使用反相液相色谱(RPLC) 柱分析难以保留的极性小分子和离子化分子。所示数据表明了分析物/样品、流动相、检测模式和其他方法适用性要求（保留性、分离度、灵敏度和峰形）的影响。

　　前言： 使用反相液相色谱法充分保留和分离极性 小分子是一项具有挑战性的任务。烷基固 定相液相色谱柱（例如 C18）通常是液相 色谱方法开发。然而，高极性分析 物对非极性 C18 固定相的亲和力较低， 保留性较差。我们可以探索几种能够在反 相模式下保留这些化合物的技术，例如， 向流动相添加离子对试剂或对分析物进行 衍生化。离子对试剂会污染液相色谱柱和 系统，一般不适用于 LC/MS。通常也不 建议采取衍生化操作，因为这是一个繁琐 的额外步骤，会增加样品的前处理时间， 并可能导致错误和重现性问题。

　　要想成功地保留和分离极性分析物，一个更好的做法是探索各种固定键合相。部分键合相非常适合棘手的极性分析物。在反相模式下，存在极性更高的键合相，它们使极性分析物与固定相之间的相互作用变得更强。其中许多固定相也可用于非常弱的流动相，如 100% 水相，从而更好地保留极性化合物。除了反相键合相，市面上还有几种亲水相互作用液相色谱 (HILIC) 柱固定相。HILIC 模式使用极性固定相保留极性化合物。在给定的分析中，哪一种色谱柱和哪一种液相色谱模式是选择，可由其他方法因素决定，包括分析物溶解度、流动相和检测模式。

　　现代液相色谱柱通常填充表面多孔颗粒填 料，这种填料以其在低反压下的高柱效而 闻名。高柱效有助于分离相邻洗脱峰，而 低反压使液相色谱仪更具灵活性。 本研究展示了一种合乎逻辑的逐步式方 法，使化学家能够利用表面多孔颗粒填料 液相色谱柱实现对极性分析物的保留、分离和检测。

　　实验部分：本实验采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统与 Agilent Ultivo LC/TQ。对标准配置的系统进行了改进，以减小系统体积和扩散。表 1 示出了配置详情。

　　结论：找到能保留和分离所有分析物的色谱柱。 • RPLC 不能保留所有极性/离子化分析物；HILIC 可能适用于这些分析物 • 某些分析物在这两种液相色谱模式下均可实现同样出色的保留和分离考虑样品：分析物溶解度和样品溶剂。 • 在 RPLC 和 HILIC 中进样强溶剂，均会对色谱分析质量产生不利影响 • 随着进样量的增加，强溶剂影响更严重 • 相比乙腈，极性化合物通常更易溶于水，这对 RPLC 是有利的

　　可使用哪种检测器？ • 确保分析物与所选检测器兼容，并且满足灵敏度要求 • HILIC 可以改善 LC/MS 分析，因为流动相更易挥发 • UV 和 RPLC 与多种流动相兼容，这可以改善分析物的保留和分离特性选择 HILIC 还是 RPLC 是一种平衡考量，需要仔细考虑色谱分离要求、分析物极性和溶解度、样品溶剂的性质以及可用的检测方式。