细菌细胞壁的染色实验
实验目的
学习掌握细菌细胞壁的染色法。
实验原理
细菌细胞壁很薄，组成细菌细胞壁的主要化学成分是肽聚糖，它与染料结合的能力差，不易着色，因此，欲通过染色来观察细胞壁，必须设法使细胞壁能着色，而细胞质则不易着色，常用的方法有单宁酸法和磷钼酸法。单宁酸和磷钼酸都是起媒染作用，它们使细胞壁形成可着色的复合物，而使细胞质不易被着色，经结晶紫或甲基绿染色后，便可在普通光学显微镜下观察到细胞壁。
实验材料
待染菌株，0.2%/5% 结晶紫水溶液，5%/10% 单宁酸（鞣酸）水溶液，1% 磷钼酸水溶液，1%甲基绿水溶液，5% 刚果红水溶液，显微镜
实验步骤
1．单宁酸法（传统方法）
（1）将培养16—18小时的菌株按常法制成涂片。
（2）用5％单宁酸染5分钟后，水洗。
（3）用0．2％结晶紫染3—5分钟，水洗，吹干。用油镜观察，细胞壁呈紫色，细胞质呈淡紫色。
2. 单宁酸法（改良方法）
（1）将培养16—18小时的菌株按常法制成涂片。
（2）用10% 单宁酸染60分钟，其间在酒精灯火焰上微热5min,水洗。
（3）用5% 结晶紫染5分钟，水洗。
（4）加5% 刚果红水溶液2min，水洗，待干，在显微镜的高倍镜或油镜下观察，细胞壁呈紫色，细胞质呈淡紫色。
3. 磷钼酸法
（1）制备浓厚的涂片，在未干时浸入1％磷钼酸水溶液3－5分钟。
（2）用1％甲基绿水溶液染3－5分钟。
（3）水洗后，吹干，用油镜观察。细胞壁为绿色，细胞质无色。
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