高效液相色谱仪检测固体废物中苯基脲类化合物的含量

高效液相色谱仪测定固体废物中苯基脲类化合物的含量

一、原理

500ml水样用 C18 固相提取小柱提取用甲醇洗脱最后提取液浓缩至 1ml样品用 C18 色谱柱在配有紫外检测器的高效液相色谱仪系统上进行分离检测。

二、试剂和材料

试剂水不含超过检测限的物体或超过检测限三分之一的干扰物质。

乙腈，HPLC 级。

甲醇，HPLC 级。

丙酮，HPLC 级。

25mM 磷酸缓冲液用于高效液相色谱仪流动相取 0.5M 磷酸钾储备液（3.5.1）和 0.5M 磷酸储备液（3.5.2）各100ml，与试剂水稀释至 4L溶液 pH 应该约为 2.4该值应该用 pH 计测量用 0.45µm 尼龙膜过滤备用。

磷酸钾原液0.5m称取68g KH 2po4，用1L试剂水溶解。

磷酸盐储备液0.5M磷酸盐34.0ml(85%，HPLC级，用试剂水稀释至1L

样品保护剂CuSO4·5H2O用于分析，为纯杀菌剂，防止微生物降解被测物。

准样品溶液

待测物储备标准溶液，除了赛苯隆和除虫脲外，其它化合物用甲醇溶解赛苯隆和除虫脲在甲醇中溶解度有限用丙酮溶解，只要进样体积如方法指定尽可能小，丙酮就不干扰分析储备液在-10°C 以下可储存 6 个月。

将25~35 mg准确地鉴定为以0.1mg溶解在甲醇中的化合物，将容量为5ml的容量瓶用甲醇稀释成规模化。

赛苯隆和除虫脲应该溶于丙酮中准确称取纯物质精确到 0.1mg10-12mg，置于 10ml 容量瓶中塞苯隆难以溶解，但 10mg 纯物质应该溶于 10ml 丙酮中超声可有助于溶解。

分析用标准样品浓度, 200µg/ml 和 10µg/ml由储备标准溶液稀释而来先用适量甲醇将储备标准溶液稀释至 200µg/ml 溶液如需 10µg/ml 浓度的标准溶液，可用 200µg/ml 的标准溶液进行进一步的稀释而得上述标准溶液可以用于校正标样，并可以在-10°C 下稳定存放三个月。

固相提取用材料

固相萃取柱，6ml填充500mg，40μm直径硅胶基质C18填料。

具有流量/真空控制功能的真空萃取装置。使用导销或阀门以避免交叉污染。

离心管，15毫升，或其他容器，适合柱萃取淋洗液。

萃取液浓缩系统1可在40℃水浴下加热15ml试管同时用氮气吹扫至一定体积。

三、仪器

具有紫外探测器或光电二极管阵列探测器的高效液相色谱仪。

首选柱为4.6×150 m m，3.5μm DP C18。

确认色谱柱、4.6或150mM、5或M氰色谱柱必须具有与优选色谱柱不同的选择性和不同的洗脱顺序。

四、分析步骤

固相提取步骤

小柱活化

小柱一旦被活化，则需在上样完成前一直保持浸润状态，不能干涸否则降低回收率用 5ml 甲醇浸润小柱填料约 30 秒暂时停止真空使之活化期间不能让甲醇液面低于填料上部用甲醇活化后，用两份 5ml 试剂水平衡小柱小心控制真空使填料保持浸润状态在上样之前，在小柱上再加入约 5ml 试剂水。

上样

打开真空，以 20ml/min（minus9-10i，Hg）的流速让样品溶液通过小柱注意：在所有样品通过小柱前，小柱不能干涸样品全部通过小柱后，抽真空minus10-15，Hg约 15 分钟，放掉真空。

小柱洗脱

在小柱中加入 3ml 甲醇，使小柱让甲醇充分浸润放掉真空允许小柱填料让甲醇浸润 30 秒打开真空，以低真空度minus2-4，Hg将样品用甲醇从小柱中洗脱出来，洗脱溶液应成滴流出至收集管用 2ml 甲醇再重复上述操作第三次用 1ml 甲醇洗脱。

洗脱液浓缩

用 40°C 以上的水浴在氮气流的吹扫下，将洗脱液浓缩至 0.5ml转移至 1ml 容量瓶用少量甲醇洗涤收集管。

高效液相色谱仪分析

优选柱：C18，4.6×150 m m，3.5μm C18。

条件：溶剂A：25mM磷酸盐缓冲液；溶剂B：乙腈梯度变化（见下表）：

检测波长：245nm下一次注射前15分钟保持平衡。

确认柱：4.6×150 m m，5μm氰基固定相柱。

条件：溶剂A：25mm磷酸盐缓冲液；溶剂B：乙腈中的梯度变化（见下表）：

平衡时间：15 分钟检测波长：240 nm。

图 1: C18 色谱柱：分离结果

图２: 确认柱-氰基柱：分离结果