中药药对虎杖 - 桂枝对急性痛风性关节炎的影响（二）
1.分组、模型复制及给药 取 SD 大鼠 48 只，随机 分为 6 组（每组 8 只），即正常对照组，模型组，阳性药秋水仙碱组（0.1 g·kg-1），虎杖 - 桂枝低、中、高 剂量组（3.5，7，14 g·kg-1，分别相当于成人临床剂量
1.1，2，4 倍）。正常对照组和模型组给予等量的生 理盐水，其他各组给予相应药物灌胃，每天 1 次，连 续 7 d。于灌胃的第 4 天给药之前先测量大鼠右后足 趾容积，灌胃 1 h 后除正常对照组外，其余各组大鼠 乙醚麻醉，6 号针头针口斜面朝前上方与胫骨呈 45°夹角刺入右踝关节腔， 一次性注入 25 mg·mL-1 的 MSU 溶液 0.2 mL， 复制大鼠急性痛风性关节炎模型，并于造模后 2，6，24，48，72 h 分别在受试大 鼠踝关节相同部位，用足趾容积测量仪测量其容积。
1.样本采集及指标的检测 第 7 天给药后 1 h，眼 眶取血置于 EP 管和 EDTA-2K 抗凝管中，Elisa 试剂 盒检测 IL-1β 和 TGF-β 含量；Ficoll 法分离外周血单核细胞[8]，采用 Trizol 法提取单核细胞的总 RNA，测 定 OD260 nm/OD280 nm 为 1.8~2.0 者采用，进行逆转录操作，严格按照试剂盒说明书进行，荧光定量 PCR 检 测 TLR2、TLR4、MyD88 表达水平。引物由宝生物 工程（大连）有限公司设计及合成， 以 β-actin 基因 序列为内参照物，引物序列见表 1。反应采用 20 μL 反应体系，严格按照 SYBR Premix Ex TapTM Ⅱ试剂 盒说明书进行。设置空白对照组的基因表达水平为1。公式 2- Ct=2-{ [Ct（ 给药组）- Ct（ 对照组）]} 目的基因 - {[Ct（ 给药组）- Ct（ 对照组）]}β-actin。处死大鼠，取右后踝关节，多聚甲醛溶液固定 24 h，置于 150 g·L-1 乙二胺四乙 酸（EDTA）中脱钙 1 周，常规脱水，石蜡包埋，经髁 突矢状面低温连续切片，厚度为 5 μm，HE 染色， 于光镜下观察病理组织形态学变化。
1.6 统计学处理方法 数据采用 SPSS19.0 统计软件 进行分析，结果以“x ± s”表示，方差齐性使用 LSD法进行比较，分级组间多重比较采用非参数秩和检验。
2 结果
2.1 药对虎杖-桂枝对急性痛风性关节炎大鼠足趾容
表 1 引物序列
Table 1 Primer sequences for PCR
基因 引物序列
β-actin F：5’-TgAgACCTTCAACACCCC-3’
R：5’-gCCATCTCTTgCTCgAAgTC-3’
TLR2 F：5’-ggCCACAggACTCAAgAgCA-3’
R：5’-AgAggCCTATCACAgCCATCAAg-3’
MyD88 F：5’- TATACCAACCCTTGCACCAAGTC-3’
R：5’- TCAGGCTCCAAGTCAGCTCATC-3’
TLR4 F：5’- CTCACAACTTCAGTGGCTGGATTTA-3’
R：5’- GTCTCCACAGCCACCAGATTCTC-3’
积的影响 与正常对照组比较，模型组在造模后不同 时间点大鼠足趾容积显著增大，差异有统计学意义 （P＜0.05）；与模型组比较，在造模后 2 h 与 6 h，虎 杖 - 桂枝低、中剂量药对组大鼠足趾容积显著减小， 差异有统计学意义（P＜0.05）；造模后 48 h 与 72 h 虎杖 - 桂枝药对低、中、高剂量组大鼠足趾容积均 显著减小，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表 2。
表 2 各组对急性痛风性关节炎大鼠不同时间点足趾容积率的比较（x ± s，n=8）
Table 2 Effect of herb pair Huzhang- Guizhi on the digital volume of rats with acute gouty arthritis induced by sodium urate at different
times
组别 | 剂量 / g·kg-1 | 足趾容积率 /% | ||||||
0 h | 2 h | 6 h | 24 h | 48 h | 72 h | |||
正常对照组 | 2.09±0.06 | 2.12±0.06 | 2.070±0.08 | 2.092±0.06 | 2.099±0.06 | 2.100±0.08 | ||
模型组 | 2.14±0.08 | 3.24±0.53* | 3.361±0.66 * | 3.692±0.65* | 2.664±0.31* | 2.470±0.24* | ||
秋水仙碱组 | 0.1 | 2.05±0.14 | 2.65±0.47▲ | 2.779±0.64▲ | 3.130±0.53 | 2.348±0.28▲ | 2.282±0.15▲ | |
虎杖 - 桂枝低剂量组 | 3.5 | 2.05±0.12 | 2.77±0.52▲ | 2.980±0.48▲ | 3.107±0.59 | 2.456±0.26▲ | 2.313±0.17▲ | |
虎杖 - 桂枝中剂量组 | 7 | 2.10±0.13 | 2.75±0.39▲ | 2.890±0.59▲ | 3.086±0.47 | 2.404±0.35▲ | 2.275±0.24▲ | |
虎杖 - 桂枝高剂量组 | 14 | 2.04±0.15 | 3.09±0.44 | 3.353±0.50 | 3.517±0.49 | 2.544±0.31▲ | 2.352±0.18▲ | |
注：与正常对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.05。 | ||||||||
2.2 滑膜组织学变化 | 见图 1。正常对照组膝关节软 | 膜细胞呈灶性增生，炎细胞弥漫性浸润，浸润的细胞 |
组织未见异常，滑膜组织光滑完整，软组织内可见正 主要为中性粒细胞﹑淋巴细胞。各给药滑膜及周围软常血管，纤维结缔组织无炎细胞浸润。模型组滑膜及 组织内见少量 - 中等量炎细胞浸润，部分小血管扩周围软组织广泛充血﹑水肿，表面有纤维素粘附，滑 张充血，间质纤维组织增生。参考文献标准[9]对滑膜
A. 正常对照组 B. 模型组 C. 秋水仙碱组 D. 虎杖 - 桂枝低剂量组 E. 虎杖 - 桂枝中剂量组 F. 虎杖 - 桂枝高剂量组
图 1 大鼠关节滑膜组织病理图（200×）的病理染色结果进行判断，模型组滑膜衬里增生、血 （P＜0.05，P＜0.01）；虎杖 - 桂枝高剂量组在改善滑管充血、纤维素沉积、滑膜组织内炎症细胞浸润情况 膜衬里增生方面效果明显，与模型组比较，差异有统和总积分值均明显增加，与正常对照组比较，差异有 计学意义（P＜0.01）；虎杖 - 桂枝低、中剂量组在改统计学意义（P＜0.01）；虎杖 - 桂枝低、中、高剂量 善纤维素沉积方面效果明显，与模型组比较，差异有组血管充血、滑膜组织内炎症细胞浸润和总积分值均 统计学意义（P＜0.05）。见表 3。
有显著降低， 与模型组比较， 差异有统计学意义
表 3 各组对滑膜组织的影响（x ± s，n=8）
