胶体金免疫层析法检测尿hCG的质量控制方法探讨
检测人绒毛膜促性腺激素(phCG)成为正常早期妊娠、异位妊娠、葡萄胎和绒癌等疾病诊断与鉴别诊断的重要方法。由于胶体金免疫层析法(GICA)的广泛应用，使尿hCG的定性检测变得简单、快速。但目前GICA亟待解决室内质量控制问题。我们以胶体金早早孕检测试纸条为例，通过几个指标，对试纸条进行质量评价，同时探讨检测时间及温度对检出率的影响，以期能有助于各实验室了解该试纸条的质量，从中建立胶体金检测尿hCG的相关室内质控方法。
1材料与方法
1．1 材料hCG免疫胶体金定性检测试纸(以下简称试纸条)，由北京蓝十字生物技术有限公司提供(批号：20040305)。hCG定值样品(50001U)，购于瑞士1170 Aubonne公司(批号：N4708801B)。
1．2方法(1)灵敏度检测：将定值hCG(5000IU)配制成含量如下的样品液(mlU／m1)：500万、400万、200万、100万、10万、5万、1万，5000、3000、1000、800，400、200、100、50、25、10。室温下，按说明书将试纸条有箭头的一端插入样品液中，注意其深度不可超过MAX标志线。15秒后取出平放，5分钟时观察结果，结果判断亦按说明书进行。每份样品液平行检测2次。(2)重复性检测：取低、中、高浓度hCG样品液(25、1000、100万mIU／m1)，在室温下，将试纸条浸入|检验地带网|样品液15秒后平放，2分钟与5分钟时观察结果，重复检测10次。(3)稳定性检测：将低、中、高浓度hCG样品液(25、1000、100万mIU／m1)在室温下放置20天后，按说明书进行检测。(4)最佳检测时间试验：取高、低浓度hCG阳性结果样品液(100万、25mIU／m1)室温下，将试纸条浸入样品液15秒后，分别在以下各时间点：1、2、3、4、5、10、30、60分钟时观察结果，每组各作2个平行测试。(5)最佳检测温度试验：取高、低浓度hCG阳性结果样品液(100万、25mlU／m1)和hOG阴性结果样品液(10mlU／m1)，分别在0、4、10、25、30、35和40℃下，将试纸条浸入样品液15秒，平放5分钟，观察结果。
2结果
2.1 灵敏度检测hCG样品为10mlU／ml和500万mIU／ml时，试纸条阴性；hCG样品为25—1000mIU／ml，试纸条阳性；hCG样品为3000—100万mIU／ml，试纸条强阳性；hCG样品为，200万一400万mIU／ml，试纸条弱阳性。检测范围为25—100万mIU／ml。
2.2重复性检测中、高浓度hCG样品在2、5分钟时结果呈色均一，低浓度hCG样品检测结果见表1(略)。
2.3稳定性检测各浓度hCG样品液测定结果(如呈色时间及呈色深浅等)与保存前完全一致。
2.4最佳检测时间高、低浓度hCG样品液在各时间点的观察结果记录见表2(略)。
2.5最佳检测温度在各温度(4—30。C)下，试纸条平放5分钟均能正常呈色，但在高温时(>35。C)，高、低浓度的hCG阳性样品，瞬间出现强阳性结果，而阴性样品仍为阴性结果。
3讨论
胶体金免疫层析法测定人尿绒毛膜促性腺激素(hCG)灵敏度高，最低检出限为25mlU／ml，但在高浓度区(>200万mIU／m1)呈弱阳性，甚至出现阴性结果(hCG为500万mlU／m1)。究其原因，可能为血清学中抗原过剩所导致的后带现象。有人报道，临床上高度怀疑葡萄胎或绒癌的患者尿液和高hCG妊娠尿液试纸条检测为弱阳性，甚至阴性，但经稀释后可呈强阳性。本研究可解释此现象出现的原因。
本试纸条可在受精后1周或停经前1周作出早孕诊断，此时血hCG浓度约为5—50mlU／ml。血、尿hCG浓度在妊娠期间呈平行关系，尿hCG浓度略低于血hCG，晨尿hCG水平最高，接近血清水平。由于孕妇体内hCG分泌水平不同，当受检者高度怀疑有受孕可能而尿液检测为阴性时，可在48—72小时后重新收集晨尿再次测定。
GICA具有快速、简便、不需特殊设备、并且可单份测定、试剂易于保存及患者可自检等优点。同时也存在后带现象及不能定量等不足，在实际操作过程中将呈色的对照线误认为质控线。事实上，“对照线”包被的是与标记结合物(金标鼠IgG)能直接结合的物质(抗鼠IgG)，这两者的结合不需待测物(hCG)的参与。因此，只能作为实验成功与否或检测试纸条是否失效的参考指标，并不能反映试纸条|检验地带网|检测尿hCG的敏感性、特异性、重复性等质量指标。我们认为，对于临床实验窒的全面室内质控都应包括这类质量指标；同时由于灵敏度的变化最敏感，且最易观察，可将敏感性的检测作为室内质控的主要途径。无论是对于不同厂家的试纸条，还是同一厂家不同批号的试纸条，我们建议在每天检测之前，都应用hCG标准品配制成各自说明书所标识的最低检测限浓度检测其灵敏度。研究发现，灵敏度指标在保证结果的可比性方面有重要作用。
在重复性试验与最佳检测时间试验时发现，高浓度样品在1分钟时就可呈色得出结果，而低浓度特别是接近最低检出限时，则需稍长时间(≥3分钟)才能得出检测结果。在2分钟时，观察阳性样品，有可能还未呈色而看似阴性结果；但在5分钟时，呈色深浅一致。检验者最好在5分钟时观察结果得出准确报告，否则可能出现假阴性结果。因此，临床实验室在建立可靠、科学的室内质控体系的同时，也应注意对检验人员责任心的培养。
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