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进行单核细胞阴性分离时遇到细胞聚集的情况该如何处理

2020.5.11

血小板激活经常在单核细胞的分离过程中造成麻烦,因为激活后的血小板会结合单核细胞并产生单核细胞与血小板聚集的不利情况。有几类因子能够引发血小板的激活效应,如温度改变,机械因素(即剪切力),暴露于抗凝剂肝素(通常存在于样品管中)下,等等。为了避免血小板的活化(及后续的单核细胞聚集),这里提供一些应遵循的常规建议:

·换用肝素之外的其它抗凝剂(如ACD,EDTA或柠檬酸钠)。

·血样应保存于室温直至制备MNC,MNC制备过程本身也应该于室温下进行。

·应轻柔地处理样品,以最大程度地减少机械剪切力。如果可能,请使用注射器/针头手动滴入血样,而不要使用Vacutainer™管,因为此类样品管中的真空条件通常会导致血小板与单核细胞的共同活化。

·柠檬酸钠已知能够“稳定”血小板并避免其活化,同时包含——除作为抗凝剂的柠檬酸缓冲液之外——茶碱,腺苷和双嘧达莫。

·请确保按照我们的实验方案来制备MNC,这些步骤专为获得低血小板含量的MNC而设计。


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