实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）分类以...
实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）分类以及实验步骤介绍
实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）技术（Real-time quantitative PCR），是指在（QPCR，荧光定量）反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号积累实时监测整个（QPCR，荧光定量）PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
实时荧光定量PCR技术于1996年由美国AppliedBiosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）它具有特异性更强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，已成为国际公认的核酸分子定量的标准方法，目前（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）在基因表达研究和临床疾病检测等领域已得到广泛应用（如转基因动植物检测、RNAi基因失活率检测、病原微生物或病毒含量检测、基因差异表达、基因分型）。本公司用Sybrgreen法或者Taqman法Real-time PCR，QPCR，荧光定量）对DNA/RNA 进行实时荧光定量PCR（Real-time PCR） 的定量测定或型的鉴定。
实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）分类：
☆TaqMan荧光探针（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5‘-3‘外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
☆SYBR Green荧光染料法：Real-time PCR|QPCR
SYBR Green是一种DNA结合染料，能非特异地掺入到双链DNA中去。在游离状态下，它不发出荧光，但一旦结合到双链DNA中以后，便可以发出荧光。在Real-time PCR|QPCR实验中它的最大优点就是可以与任意引物、模板相配合，用于任意反应体系中。从经济角度考虑，它也比其它的探针的Real-time PCR|QPCR价格要便宜得多。但由于它能与所有的双链DNA结合，所以一旦反应体系中出现非特异扩增，那它就会影响到定量结果的可靠性与重复性。要避免这种不利因素，可以通过选择良好的引物并优化反应条件以消除非特异性影响。
●主要实验步骤如下：
实时荧光定量PCR（Real-time PCR）是由三个步骤组成:
反转录:依赖反转录酶将RNA反转录成cDNDA;
2.扩增:用PCR的方法扩增cDNA;
3.检测:实时检测和定量扩增的产物.
实时荧光定量PCR|Real-time PCR|QPCR中的一些术语
1 CT值：荧光信号有统计意义显著增长(即穿过阈值线)时的循环次数，或者说是从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数。
2 阈值：阈值的默认设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。
3 CT值与起始模板的量成线性关系。
