目的

使用沃特世(Waters®)ACQUITY UPC²™系统将药典中氨苯砜含量的正相HPLC测定方法转换为超临界流体色谱(SFC)方法。

背景

目前，美国药典(USP)规定了含有氨苯砜(4,4’-二氨基二苯砜，CAS #80-08-0)药物片剂的正相HPLC分析方法。使用4.0 x 300 mm，10µm的硅胶柱(L3)进行等度分离，流动相为正己烷、异丙醇、乙腈和乙酸乙酯(7:1:1:1)的混合溶液。该方法的运行时间约为12.5min(最后一个主峰出峰时间的2倍，流速1.5mL/min)。如大多数药典中的方法一样，本方法经过验证且可靠。但是，该方法使用了正己烷和乙酸乙酯溶剂。出于健康、安全和环保的原因，许多实验室都想减少这些溶剂的使用。超临界液体色谱(SFC)是一种正相色谱分离技术，其使用CO₂作为主流动相，以极性溶剂(如甲醇)作为改性剂。由于SFC的原理与HPLC的原理相似，因此，目前的方法应该能够转换成SFC方法，减少溶剂的消耗和处理，降低每次分析的成本，同时增强了健康、安全和环境方面的保护。转换成SFC的色谱方法必须保持数据质量，而且必须得到与目前正相色谱

方法一致的实验结果。

对寻求更高效、更低成本的氨苯砜片分析方法的实验室而言，ACQUITY UPC²系统不愧为理想之选，该方法同时加强了健康、安全和环境方面的保护。

解决方案

使用目前美国药典(USP)方法，制备和分析氨苯砜标准品和片剂样品，如图1所示(该样品也用于SFC分析)。使用目前USP方法的分析结果与使用ACQUITY UPC²方法得到的结果进行对比，如图2所示。

SFC方法的条件如下：

色谱柱： ACQUITY UPC² BEH，3.0 x 50 mm，1.7µm

柱温： 45 °C

流动相： 85% CO2:15% MeOH

流速： 3.0 mL/min,

背压： 130 bar/1885 psi

检测器： UV /PDA，254 nm

药典方法所列出的适应性条件是最低要求(相对标准偏差不得大于2%)。标准品6次重复进样，目前正相HPLC方法得到的保留时间和峰面积的相对标准偏差(%)分别为<0.1%，<1.1%。超高效合相色谱方法UltraPerformance Convergence Chromatography™(UPC²)重复6次进样得到的实验结果符合USP药典系统适应性要求(保留时间RSD值0.8%，峰面积RSD值0.9%)，且运行速度(1.75 min)大大加快。两种方法测定片剂样品的分析结果高度一致。本例中，每次正相HPLC分析使用正己烷13.1mL，异丙醇、乙腈和乙酸乙酯各1.9mL 。相比之下，UPC²方法仅消耗约0.50mL甲醇。这说明了通过将正相色谱方法转换为UPC²方法可以大大地减少有机溶液的使用。根据目前的溶剂价格，每次正相色谱HPLC分析成本大约为1.08美元；相比之下，UPC²仅为0.01美元。

总结

使用ACQUITY UPC²，可以成功地将美国药典的HPLC方法转换为UPC²方法。这种新的UPC²方法得到的数据与目前的HPLC方法相当，甚至更好；速度是目前的HPLC方法的7倍，并且消耗的溶剂更少。我们以更快的速度得到高品质的分析数据，则实验室生产率提高，每个样本的分析成本降低。ACQUITY UPC²系统是实验室将目前的正相HPLC方法转换为更高效、更省钱的UPC²的方法的一种理想的解决方案，同时也增强了健康、安全和环境方面的保护。