正常大鼠施旺细胞的培养

实验材料：
1. 生后2d大鼠的坐骨神经；
2. 不含Ca²⁺和Mg²⁺的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶和0.03%胶原酶的混合消化液；
4. 培养液a：DMEM培养液，加入0.02—0.025mol/L HEPES，pH7.2；
5. 培养液b：DMEM，添加10%FBS；
6. 培养器具：眼科剪、眼科镊、网眼孔径为60μm的尼龙滤网；

实验方法：
1. 用70%乙醇消毒动物，断头处死，取坐骨神经，放入预冷的培养液a中；
2. 将坐骨神经移入混合消化液中，在37℃水浴中振荡消化15min；
3. 换新鲜消化液，再次消化15min；
4. 吸去消化液，用培养液b清洗2次，再加入新鲜培养液b，然后用吸管反复吹打。用孔径为60μm的尼龙滤网，收集滤液，以2000r/min离心10min；
5. 吸去上清液，用培养液b混悬沉淀细胞，将细胞种植于培养瓶或培养皿中，静置培养24h；
6. 加入10-5mol/L阿糖胞苷，继续培养48—72h。当细胞生长形成单层时，进行传代。