抗血栓药物引起的血小板钙流变化检测过程详解

　　血小板是从骨髓成熟的巨核细胞胞浆解脱落下来的小块胞质，虽然仅占骨髓有核细胞总数的0.05% ，但是它在血管损伤后的止血过程中起着重要作用。除了自然止血外，它还影响着血管中血栓的形成，进而形成血栓性疾病，如心梗和缺血性中风等。

　　正常生理条件下，未受伤的血管系统中血小板不发生粘附、活化和聚集。血小板活化在血栓形成中起重要作用，活化可分为初级活化和进一步活化。进一步活化中有很多活性物质如胶原、二磷酸腺苷(ADP)等都可以与血小板膜上相关受体结合，进行进一步激活，如大家熟知的GPCRs受体。血小板胞质溶胶内游离钙离子浓度的变化在血小板进一步激活中扮演至关重要的角色，当其钙离子升高会促进血小板活化，反之亦然。

　　钙离子作为细胞内重要的第二信使，参与了多数生物活动过程。血小板活化过程中伴随着细胞内钙离子的跨膜内流和血小板钙库的钙离子释放，钙离子浓度升高后，血小板钙库的质膜上的钙离子ATP酶将钙离子重新转运回到钙库之中。钙离子流的变化是基于毫秒级别，不通过特殊、有效的检测手段很难在较短时间内获得大量、准确的实验结果。

　　目前较为主流的细胞内钙离子检测手段是荧光探针标记法，如 Flou-4 、Indo-1 、Fura-2等。在众多荧光探针种类中，Fura-2荧光探针以其自身优势深受大家喜爱，可直接用于微孔板读板机系统或成像系统对其进行观察。传统 Fura-2 荧光探针需要每个步骤进行清洗，相对比较繁琐。Molecular Devices 出品的 Fura-2 QBT 具有ZL的防止信号屏蔽的作用，FlexStation 3 是MD推出的一款内置多通道自动移液装置，具有的Flex模式可以在短时间（毫秒级）获得有效信号强度， 两者结合能让您单位时间内获得准确、可靠的结果。

　　本次我们将介绍 Fura-2 QBT钙流试剂盒在FlexStation 3 微孔板检测平台如何进行实验操作和软件设置，获得相应结果后如何分析。我们提供了可重复、可量化操作的解决方案，适合于高通量血小板细胞钙离子检测的方式，可用于激动剂EC50和拮抗剂IC50检测和筛选工作。