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体外培养细胞的种类命名以及建立细胞系或细胞株要求...

2020.9.01

二、建立细胞系(或株)的要求

关于什么样的体外培养细胞群,可被确认为是已被鉴定的细胞(Certified Cells),国际上也尚无统一的规定,一般依具体情况而定。在只用作初代培养细胞,只要供体性别、年龄等均一,取材部位及组织种类等条件稳定,做鉴定的项目无需很多,有几项能说明细胞的相关性状的即可。如能长期保存并可供其它研究室使用,特别是做反复传代的细胞,习惯上有以下一些要求,并在刊物上报道时应加以说明。

(-)组织来源

应说明细胞供体所属物种,来自人体,动物或其它;供体的年龄、性别、取材的器官或组织;如系肿瘤组织,应说明临床病理诊断,组织来源,以及病例号等。

(二)细胞生物学检测

应了解细胞一般和特殊的生物学性状,如细胞的一般形态、特异结构、细胞生长曲线和分裂指数、倍增时间、接种率;特异性,如为腺细胞有否特殊产物包括分泌蛋白或激素等;如为肿瘤细胞,应力求证明细胞确系来源于原肿瘤组织而非其它,并仍保持性性,为此需做软琼脂培养、异体动物接种致瘤性和对正常组织浸润力等实验。

(三)培养条件和方法

各种细胞都有自己比较适应的生存环境,因此应指明使用的培养基、血清种类、用量以及细胞生存的适宜pH等。

三、已建立细胞系或株的鉴定、管理和使用

近些年,当一个细胞系或细胞林建成后,我国常通过组织专家开鉴定会的形式予以鉴定,从学术角度考虑,此举实非必要。按国际惯例,只要研究认真负责地把有关资料在杂志或刊物上报道,详细介绍上述各项目即可。

以前因未建立统一的细胞库时,对已建立的细胞系(株)多由作者单位自行保管,有浪费人力、交流使用不便、细胞易污染和丢失等弊病。我国已初建成小规模贮存细胞机构,待获进一步发展,这对我国细胞培养必将有更大促进作用。

国际上美、英和日本等国已建有细胞库;美国已有美国标准细胞库或细胞银行(ATCC)和人遗传突变细胞库(HGMR)、细胞衰老细胞库(CAR)等,其中 ATCC不仅是美国也世界最大的细胞库。ATCC下属有一组协作实验室和一个由众多专家组成的咨询委员会。ATCC也是美国国立癌症研究所(NCI)和美国卫生研究所中(NIH)的资源库,尤与NCI有密切的关系。ATCC也是世界卫生组织WHO的国际培养细胞文献中心。ATCC现液氮冻存有3200个已经过鉴定的细胞系(1992),其中包括来自正常人和各种疾病患者的皮肤成纤维细胞系;和来自不同物种的近75个杂交瘤细胞株。ATCC接纳来自世界各国已经鉴定的细胞予以贮存,同时也向世界各国的研究者或实验室免费提供研究用细胞(做盈利性研究时收费。) ATCC接纳入库细胞时,必须符合其入库标准, ATCC入库细胞要求检测项目如下:

培养简历:组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等

冻 存 液:培养基和防冻液名称

细胞活力:融解前后细胞接种存活率和生长特性

培 养 液:培养基种类和名称(一般要求不含抗生素)、血清来源和含量

细胞形态:类型,如为上皮或成纤维细胞等,融解后细胞生长特性

核 型:二倍体或多倍体,标记染色体的有无

无污染检测:包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等

物种检测:检测同工酶,主要为G6PD和 LDH,以证明细胞有否交叉污染以及反转录酶检测

免疫检测:一两种血清学检测

细胞建立者:建立者姓名;检测者姓名

以上为ATCC入库基本要求,杂交瘤入库标准尚有所不同,详细情况请参阅ATCC的“Catalogue of Cell Lines and Hybridomas”。


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