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细胞器的光镜观察(2)

2020.9.15

(三)方法

1. 动物细胞骨架的显示方法

（1）无菌条件下，在25 ml 培养瓶中放入清洁无菌的盖玻条，然后接种3 ml左右的细胞悬液，盖紧瓶塞，37℃恒温箱内培养24小时。

(2) 取出盖玻片条，浸入装有6mmol磷酸缓冲液的小瓶中5～10分钟。

(3) 用吸管吸弃6mmol/l磷酸缓冲液，加入2% triton，x-100液，盖紧瓶塞，置37℃恒温箱中处理20~30分钟。

(4) 用吸管吸弃triton，x-100液，加入m-缓冲液，轻轻洗涂细胞3次，每次3分钟。

(5) 用吸管吸弃m-缓冲液，加入3%戊二醛溶液。固定8～10分钟。

(6) 吸弃固定液，用6mmol/l磷酸缓冲液反复冲洗3次，每次10分钟。

(7) 取出盖玻片条，放在小培养皿中，加入0.2%考马斯亮蓝染液数滴，染色30分钟以上。

(8) 用蒸馏水冲洗玻片，空气干燥。

(9) 观察：光镜下可见细胞中分布着许多被染成蓝色的网络状结构，此即细胞骨架。

图 3-1 细胞骨架

图3-2光镜下高尔基复合体

三、永久制片标本的观察

由于不同的细胞器需用不同的染色方法才能显示出来，故要在不同的标本中观察。

（一）高尔基复合体

电镜下所见的高尔基复合体是由小囊泡、扁平囊泡、大囊泡三部分组成，但在光镜下所见的却与此截然不同，呈点状或螺旋状。

观察麻雀小脑、兔或猫的脊神经节切片标本，低倍镜下观察，可见到许多大小不等、被染成黄色的圆形神经节细胞，该细胞中央有一不着色呈空泡状的圆形细胞核可作为该细胞的标志。选择神经节细胞较多的部位，转换高倍镜或油镜仔细观察，可清晰看到细胞中央圆形、空泡状细胞核，有的核内可见1~2个发亮的呈淡黄色的核仁。细胞质中散在许多棕黑色颗粒状或短线状的结构，就是高尔基复合体。高尔基复合体在细胞内的位置一般集中于细胞核外的某一区域，但在镜下所见的神经节细胞中高尔基复合体却多半围绕在整个细胞的周围。在视野中也可以看到没有经过核的切面，该细胞内高尔基复合体就好象散在整个细胞中。
（二）线粒体

1. 将蟾蜍肾脏切片置于低倍镜下观察，视野中可见到许多圆形或椭圆形的中肾小管横切面，每一中肾小管的中央为管腔，管壁由紧密排列的单层上皮细胞组成，管壁细胞之间界限不甚清楚，但可根据核的位置大致确定细胞的范围。转换高倍镜或油镜观察，可见细胞核呈圆形，浅蓝色，内有一深染的核仁，核周围的细胞质中有许多蓝黑色颗粒或线状的结构，即为线粒体。

2. 在蛙肝脏组织的玻片标本上，横切面呈三角形和深蓝色。首先在低倍镜下找到蛙的肝脏组织的横切面，调清视野，然后转换到高倍镜或油镜观察。可以看到细胞的界限不太清楚，细胞中央不着色的部位或浅染区是细胞核，内有1个或多个核仁。在细胞核周围的细胞质中有许多染成深蓝色的线状、短棒状或颗粒状的结构，这就是线粒体。

（三）中心粒

观察马蛔虫的子宫横切片。在低倍镜下观察，可以看到宫腔内有许多处于不同分裂时期的受精卵，外围有一层厚的受精膜（注意不要误以为受精卵的细胞膜），膜内为大的围卵腔。寻找其受精卵处于有丝分裂中期的细胞，然后换高倍镜观察。可在细胞两极看到明显的中心体。每个中心体含有一个被染成深蓝色的小粒，称为中心粒，在中心粒周围有一团较致密的物质，称为中心球，中心粒和中心球合称中心体。在中心体的外围隐约可见放射状的星射线。两个中心粒之间丝状的结构，称纺锤体。